[发明专利]一种嗜酸乳杆菌抗冻培养基及其应用方法

说明书

技术领域

本发明属于嗜酸乳杆菌制品生产技术领域，涉及一种提高嗜酸乳杆菌冻干存活率及菌粉活菌数的抗冻培养基及其应用方法。

背景技术

嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)是人和动物肠道内的主要微生物之一，也是目前乳酸菌家族中极为重视研究开发的益生菌。当存在一定数量时，它能有效地调节肠道内有益和有害微生物菌群间的平衡，从而达到促进宿主健康的功效。大量科学研究证明嗜酸乳杆菌具有：①缓解乳糖不耐症；②抑制肠道中的致病菌，预防腹泻发生；③增进机体的免疫能力；④降低血清胆固醇水平；⑤抑制诱导肿瘤细胞生成的前体物质，预防癌变细胞的形成。

真空冷冻干燥具有以下几个优点：①蛋白质、微生物不产生或较少变性或失去活力；②物料中的挥发性成分或热敏性营养成分损失少；③在低温下，能最好地保持物质原来的性状：④干燥后体积、形状变化，物料呈海绵状，无干缩，复水时，能迅速回复到原来的性状；⑤能除去物料中95％-99％的水分，制品保存期长。

目前，利用冻干技术制备和贮存嗜酸乳杆菌菌粉已有很多报道。然而，由于嗜酸乳杆菌特有的生理性状，菌体细胞在冷冻和干燥过程中死亡率很高，造成菌粉中活菌含量低而影响产品质量。同时，要提高菌粉的常温稳定性，还必须把冻干过程对活菌的不良损伤尽可能减少。要实现此目的，可在冻干前的菌泥中加入复合保护剂，这是目前主要采用的方法，如CN200910236172.8中公开了一种嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂，其配方如下：9～11重量份脱脂奶粉、10～12重量份乳糖、0.3～0.6重量份甘油、1.5～2.5重量份谷氨酸钠和0.15～0.25重量份维生素C；CN200910056871.4中也公开了一种嗜酸乳杆菌冻干保护剂，保护剂配方各组份重量百分比为谷氨酸钠0.1～5.0％、乳糖0.1～8.0％、海藻糖1～15％、抗氧化剂0.1～1％、脱脂奶粉1～20％、甘油或吐温-800.1～5.0％，其余为水。文献“PVPK-30对嗜酸乳杆菌的冻干保护研究”中公开了一种嗜酸乳杆菌保护剂配方为4％PVP K-30、20％脱脂乳、6％海藻糖、0.5％谷氨酸钠和4％甘油。

除此之外，还可以在培养基中添加一些物质，这些物质可在培养的过程中积累在嗜酸乳杆菌体内或转化成其它物质，抑制冻干过程中共晶现象的发生，这些物质的添加也可改变嗜酸乳杆菌细胞膜脂肪酸组成，甚至诱导细胞产生大量的抗冻蛋白，从而有效提高嗜酸乳杆菌菌体的抗冷冻能力，可以达到减少甚至避免菌体冻干损伤、提高活菌存活率和菌粉活菌数、延长冻干嗜酸乳杆菌菌粉常温保存期的目的。目前还没有检索到有关嗜酸乳杆菌抗冻培养基方面的发明专利。

发明内容

本发明的目的在于提供一种嗜酸乳杆菌抗冻培养基及其应用方法，解决了嗜酸乳杆菌在冻干过程中存在的冻干存活率不高，活菌数低的问题。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种嗜酸乳杆菌抗冻培养基，该抗冻培养基的配方组成包括以下组分：16-20g葡萄糖、0.4-0.8g蒺藜多糖、3-5g酵母提取物、4-6g氯化钠、0.3-0.5g甘露醇、0.8-1.2g谷氨酸钠，8-12g大豆蛋白胨、0.5-2.0g柠檬酸氢二铵、0.2-0.5g甜菜碱、1.0-2.5g磷酸氢二钾、0.1-0.2g MgSO₄、0.5-1.0ml吐温80和1000ml蒸馏水。

所述抗冻培养基的配方组成包括以下组分：18g葡萄糖、0.5g蒺藜多糖、3.5g酵母提取物、5.0g氯化钠、0.35g甘露醇、1.0g谷氨酸钠，9.0g大豆蛋白胨、1.5g柠檬酸氢二铵、0.4g甜菜碱、1.5g磷酸氢二钾、0.1g MgSO₄、0.8ml吐温80和1000ml蒸馏水。

所述抗冻培养基的配方组成包括以下组分：20g葡萄糖、0.5g蒺藜多糖、4.5g酵母提取物、4.0g氯化钠、0.4g甘露醇、1.2g谷氨酸钠，8.0g大豆蛋白胨、2.0g柠檬酸氢二铵、0.5g甜菜碱、1.5g磷酸氢二钾、0.1g MgSO₄、1.0ml吐温80和1000ml蒸馏水。

所述嗜酸乳杆菌抗冻培养基的制备方法，包括以下步骤：

(1)将按量称取的谷氨酸钠、甜菜碱和甘露醇溶解于50mL蒸馏水中，然后用0.22μm滤膜过滤除菌得滤液；