[发明专利]一种稳定、高效从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法无效
| 申请号： | 201110372481.5 | 申请日： | 2011-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN102382166A | 公开（公告）日： | 2012-03-21 |
| 发明（设计）人： | 祁建民;陈涛;李小珍;徐建堂;秦先超;方平平;林培清;陶爱芬 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C07K1/26 | 分类号： | C07K1/26 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 稳定 高效 红麻 叶片 分离 蛋白质 双向 电泳 方法 | ||
1.一种稳定、高效从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法，其特征在于，采用pH值为8.0的Tris-饱和酚抽提红麻叶片中的蛋白质，然后进行双向电泳，双向电泳的条件如下：第一向电泳：红麻蛋白质上样量为1.4mg，使用24CM，pH值为4-7的IPG胶条、pH值为4-6.5的IPG buffer；第一向电泳参数设置为：20℃、50μA/strip、50V 12h 、200V 1h 、500V 1h 、1000V 1h 、梯度1000V～8000V 1h 、8000V 52000vhr；第二向电泳中采用12%分离胶来纵向分离蛋白，第二向电泳参数设置为：15℃、10μA/strip 1h 、15μA/strip。
2.如权利要求1所述的一种稳定、高效从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法，其特征在于，采用pH值为8.0的Tris-饱和酚抽提取红麻叶片中的蛋白质的具体操作为: 取1g红麻新鲜叶片，置于冰冷的研钵中，加入聚乙烯吡咯烷酮PVP，用液氮进行研磨45min，加入5ml提取液，提取液配方：100mmol/LTris、50mmol/L抗坏血酸、100mmol/L氯化钾、50mmol/L硼砂、1％Triton X-100、2%β-巯基乙醇，继续研磨15min，加入等体积的pH 8.0 Tris-饱和酚，涡旋， 15000r/min，4℃离心15min；取酚层，加入6倍体积0.1mol/L乙酸铵甲醇溶液，-20℃静置过夜，15000r/min，4℃离心15min，弃上清液，沉淀用-20℃预冷的含2％β－巯基乙醇的甲醇溶液洗涤2次，沉淀真空干燥成干粉。
3.如权利要求1所述的一种稳定、高效从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法，其特征在于，第一向电泳中采用主动上样方式上样。
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