[发明专利]一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素A的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素A的方法，所述方法包括：

(1)将含有布雷菲德菌素A的发酵液，经固液分离去除固体杂质，得到澄清的布雷菲德菌素A发酵液上清液；

(2)以非极性大孔吸附树脂为吸附剂，对步骤(1)所得布雷菲德菌素A溶液进行吸附层析操作，待树脂吸附至饱和，水洗去除未吸附杂质，再以体积浓度30～60％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱，洗脱液减压蒸馏回收溶剂、浓缩，获得布雷菲德菌素A粗品；所述非极性大孔吸附树脂为下列之一或其中两种以上的混合物：HZ830、HZ820、HZ818、HZ816、HZ841、HZ801；

(3)将步骤(2)布雷菲德菌素A粗品复溶于乙醇中，得到布雷菲德菌素A饱和乙醇溶液，再以溶析结晶或冷却结晶方式进行结晶操作，所得晶体在-4.0×10^-3～-4.0×10^-1MPa、4～40℃条件下真空干燥1～24小时，即得所述高纯度布雷菲德菌素A。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含有布雷菲德菌素A的发酵液由布雷正青霉变种CCTCC No：M 208113发酵获得。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(1)为：将含有布雷菲德菌素A的发酵液，常温下9000r min^-1离心10分钟，收集上清液，即为所述澄清的布雷菲德菌素A发酵液上清液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)为：步骤(1)所得布雷菲德菌素A发酵液上清液用非极性大孔吸附树脂吸附至饱和，先用2～4B.V.的水淋洗除杂，再用3～8B.V.的体积浓度30～80％的乙醇或甲醇水溶液以0.05～0.20B.V./分钟的流速洗脱，洗脱液在-4.0×10^-2～-8.0×10^-2MPa、40～60℃条件下减压蒸馏回收溶剂，真空浓缩，得到布雷菲德菌素A粗品。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)为：步骤(2)所得布雷菲德菌素A粗品进一步于30～70℃下用适量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A饱和乙醇溶液，然后进行冷却结晶操作：晶种投入量0.5～10.0mg/ml，控制降温速度为0.05～5℃/min，搅拌速度10～400r/min，出晶温度4～45℃，养晶时间0.5～72小时；抽滤，所得晶体在-4.0×10^-3～-4.0×10^-1MPa、4～40℃条件下真空干燥1～24小时，获得高纯度布雷菲德菌素A晶体。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)为：步骤(2)所得布雷菲德菌素A粗品常温下用适量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A饱和乙醇溶液，进行溶析结晶操作：晶种投入量0.5～10.0mg/ml，在蠕动泵的控制下匀速将反溶剂水滴入至布雷菲德菌素A乙醇溶液，直至乙醇∶水体积比为1∶0.5～5，搅拌速度10～400r/min，所有反溶剂0.5～24小时滴完，养晶0.5～72小时；抽滤，所得晶体在-4.0×10^-3～-4.0×10^-1MPa、4～40℃条件下真空干燥1～24小时，得到高纯度布雷菲德菌素A晶体。