[发明专利]一株链霉菌及其在生产棘霉素中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株链霉菌及其在生产棘霉素中的应用。

背景技术

癌症是一种非常古老的疾病，伴随着整个人类发展的历史，严重威胁着人类的健康与生命。

棘霉素(Echinomycin)自1998年以来就一直作为一种抗肿瘤药物在进行II期临床试验。棘霉素是一个DNA双插入试剂，能够与肿瘤细胞的DNA发生相互作用从而抑制其复制和转录。棘霉素还涉及对细胞凋亡的促进作用。除了抗肿瘤作用外，棘霉素对许多病原微生物也具有显著的抑制作用，如结核分枝杆菌、炭疽杆菌等。

除了长期被作为一种抗肿瘤抗生素进行研究外，近年来，棘霉素的抗微生物活性和发色团的荧光性质也逐渐引起人们的关注，利用其喹喔啉环发色团在插入双链DNA后能引起电信号发生变化的性质，可用来研制电化学DNA传感器，用于鉴别单链和双链DNA。另外，棘霉素还有望作为一种高灵敏度和专一性的DNA荧光探针，用于与核酸分子成像有关的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一株链霉菌及其在生产棘霉素中的应用。

本发明提供的链霉菌(Streptomyces sp.)LS462，已于2011年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.5453。

本发明还保护所述链霉菌LS462在生产棘霉素中的应用。

本发明还保护一种种子培养基，是通过如下方法制备得到的培养基：将20-30g可溶性淀粉、0.2-0.6gL-天冬酰胺、0.5-1.0g KNO₃、0.2-0.6g K₂HPO₄·H₂O、0.2-0.6gNaCl和0.2-1.0g MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。所述种子培养基的pH可为7.0-7.5。所述种子培养基具体可通过如下方法制备得到：将25g可溶性淀粉、0.4g L-天冬酰胺、0.8g KNO₃、0.4g K₂HPO₄·H₂O、0.4g NaCl和0.6g MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。

本发明还保护一种发酵培养基，是通过如下方法制备得到的培养基：将5-15g葡萄糖、10-30g稷粉、10-30g棉籽蛋白粉和10-30g 3-(N-吗啉基)丙磺酸用水定容至1L。所述发酵培养基的pH可为7.0-7.5。所述发酵培养基培养基具体可通过如下方法制备得到：将10g葡萄糖、20g稷粉、20g棉籽蛋白粉和20g 3-(N-吗啉基)丙磺酸用水定容至1L。

本发明还保护一种制备棘霉素的方法，是发酵所述链霉菌LS462，得到棘霉素。所述发酵的条件具体可为25-30℃、140-200rpm、6-15天。所述发酵的条件具体可为28℃、180rpm、10天。

所述方法具体可包括如下步骤：将所述链霉菌LS462的种子液接种至所述发酵培养基中发酵并收获发酵液。

所述方法中，可将5ml所述种子液接种至100ml所述发酵培养基中。所述种子液具体可通过如下方法制备：将所述链霉菌LS462接种于所述种子培养基中，25-30℃(如28℃)、140-200rpm(如180rpm)培养2-6天(如96小时)，得到种子液。

所述方法还可包括如下步骤：

(1)将所述发酵液离心(离心参数具体可为：4℃、8000转/min、15min)，分别收集上清液和沉淀；

(2)将步骤(1)获得的沉淀用丙酮浸提(可室温静置10小时)，离心(离心参数具体可为：4℃、8000转/min、15min)并收集上清液；

(3)将步骤(1)的上清液和步骤(2)的上清液合并，即为棘霉素粗提液(菌株粗提液)；

(4)将所述棘霉素粗提液上样于HP-20大孔吸附树脂，依次用体积百分比为40％和60％的丙酮水溶液洗脱(各一升)，收集用60％丙酮水溶液洗脱得到的过柱后洗脱液；