[发明专利]一株链霉菌及其在生产棘霉素中的应用

权利要求书

1.链霉菌(Streptomyces sp.)LS462，它的保藏编号为CGMCC No.5453。

2.权利要求1所述链霉菌LS462在生产棘霉素中的应用。

3.用于培养权利要求1所述链霉菌LS462的培养基，是通过如下方法制备得到的培养基：将20-30g可溶性淀粉、0.2-0.6gL-天冬酰胺、0.5-1.0g KNO₃、0.2-0.6gK₂HPO₄·H₂O、0.2-0.6gNaCl和0.2-1.0g MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。

4.用于培养权利要求1所述链霉菌LS462的培养基，是通过如下方法制备得到的培养基：将5-15g葡萄糖、10-30g稷粉、10-30g棉籽蛋白粉和10-30g 3-(N-吗啉基)丙磺酸用水定容至1L。

5.一种制备棘霉素的方法，是发酵权利要求1所述链霉菌LS462，得到棘霉素。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述发酵的条件为25-30℃、140-200rpm、6-15天。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将权利要求1所述链霉菌LS462的种子液接种至权利要求4所述培养基中发酵并收获发酵液。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述种子液的制备方法如下：将权利要求1所述链霉菌LS462接种于权利要求3所述培养基中，25-30℃、140-200rpm培养2-6天，得到种子液。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：

(1)将所述发酵液离心，分别收集上清液和沉淀；

(2)将步骤(1)获得的沉淀用丙酮浸提，离心并收集上清液；

(3)将步骤(1)的上清液和步骤(2)的上清液合并，即为棘霉素粗提液；

(4)将所述棘霉素粗提液上样于HP-20大孔吸附树脂，依次用体积百分比为40％和60％的丙酮水溶液洗脱，收集用60％丙酮水溶液洗脱得到的过柱后洗脱液；

(5)将步骤(4)收集的过柱后洗脱液蒸干并用丙酮重新溶解，过滤后进行反相HPLC；反相HPLC参数：采用Agilent ZORBAX XDB C-18 column；流动相为体积百分比为70％的甲醇水溶液，流速为2.0ml/min；收集保留时间为26.3-27.2min的过柱后洗脱液，得到棘霉素。