[发明专利]一种嗜热菌蛋白酶的固定化方法

权利要求书

1.一种嗜热菌蛋白酶的固定化方法，所述方法包括：

(1)载体活化：将氨基化的介孔泡沫硅载体MCFs-NH₂浸渍在0.5～2.5mM的对苯醌溶液中，在20～30℃、100～200rpm的条件下振荡活化1～3小时，离心，取沉淀依次用20～30％乙醇和纯水洗涤，洗涤后的沉淀重新分散于MES-NaOH溶液中，得到活化的载体液；

(2)酶的固定化：将活化的载体液，按40～100mg嗜热菌蛋白酶/gMCFs-NH₂的加酶量，加入嗜热菌蛋白酶得到混合液，将混合液在冰浴中电磁搅拌反应18～20h或者在0～7℃、20～50W微波条件下照射2～4min，离心，取沉淀用MES-NaOH溶液洗涤，得到固定化嗜热菌蛋白酶；

步骤(1)和(2)中所述MES-NaOH溶液组成如下：NaCl2～5M，ZnCl₂10～30mM，MES-NaOH 0.01～0.05M，pH 7.0～7.5，溶剂为水。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述嗜热菌蛋白酶以MES-NaOH溶液分散后添加到载体液中，所述嗜热菌蛋白酶在MES-NaOH溶液中浓度为0.5～2mg/mL，所述MES-NaOH溶液组成如下：NaCl 2～5M，ZnCl₂ 10～30mM，MES-NaOH 0.01～0.05M，pH7.0～7.5，溶剂为水。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中对苯醌溶液与MCFs-NH₂的体积质量用量之比为2～5ml∶10mg。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中重新分散时所用的MES-NaOH溶液与MCFs-NH₂的体积质量用量之比为2～5ml∶10mg。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(A)酶的分散：取嗜热菌蛋白酶，用MES-NaOH溶液分散，在-4℃下放置半小时，即得嗜热菌蛋白酶的脂肪酸甲酯磺酸盐溶液；

(B)载体活化：将氨基化的介孔泡沫硅载体MCFs-NH₂浸渍在1.5mM的对苯醌溶液中，在25℃、160rpm的条件下振荡活化2小时，离心，取沉淀依次用20％乙醇和纯水洗涤，洗涤后的沉淀重新分散于MES-NaOH溶液中，得到活化的载体液；

(C)酶的固定化：将活化的载体液，按40～100mg嗜热菌蛋白酶/gMCFs-NH₂的加酶量，加入嗜热菌蛋白酶的脂肪酸甲酯磺酸盐溶液得到混合液，将混合液在冰浴中电磁搅拌反应20h或者在0～7℃、40W微波条件下照射3min，离心，取沉淀用MES-NaOH溶液洗涤，得到固定化嗜热菌蛋白酶；

步骤(A)～(C)中所述MES-NaOH溶液组成如下：NaCl3M，ZnCl₂20mM，MES-NaOH 0.02M，pH 7.0，溶剂为水。