[发明专利]一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法有效
| 申请号： | 201110361128.7 | 申请日： | 2011-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN102433354A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 乔利仙;丁霄;隋炯明;王晶珊;刘文平 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12Q1/68;A01H4/00;A01H5/00 |
| 代理公司： | 青岛联智专利商标事务所有限公司 37101 | 代理人： | 崔滨生 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 将木糖异构酶 基因 用于 花生 遗传 转化 筛选 方法 | ||
1.一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于它包括以下步骤：
(1) 将目的基因插入到含木糖异构酶基因xylA的植物表达载体中，构建含有目的基因的重组载体；
(2) 将重组载体转化花生胚小叶外植体；
(3) 将转化后胚小叶外植体转移到添加有蔗糖和木糖的诱导培养基上进行培养，4~5周后诱导出体胚；
(4) 将体胚转移到添加有蔗糖和木糖的萌发培养基上进行培养，4~5个月后诱导成苗；
(5) 对再生苗进行PCR检测，获得转基因阳性植株；
(6) 将转基因阳性植株通过嫁接方法移栽田间。
2.根据权利要求 1所述的一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于所述步骤(1)中植物表达载体为pCAMBIA1301-xylA。
3.根据权利要求 1所述的一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于所述步骤(2)中利用农杆菌介导法将重组载体转化花生胚小叶外植体。
4.根据权利要求 1所述的一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于所述步骤(3)中诱导培养基是含有5g/L蔗糖、10g/L木糖、10mg/L 2,4-D的MS-B5培养基。
5.根据权利要求 1所述的一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于所述步骤(4)中萌发培养基是含有5g/L蔗糖、10g/L木糖、4mg/L BAP的MS-B5培养基。
6.根据权利要求 4或5所述的一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于所述步骤(3)和(4)中的培养条件为25℃、3000lx、每日光照13h。
7.根据权利要求 1所述的一种将木糖异构酶基因用于花生遗传转化的筛选方法，其特征在于所述步骤 (5)中PCR检测的xylA基因引物为：
上游引物为5ˊ-CTCGAGATGGAGTTCAATATGCAAGCCTA-3ˊ，
下游引物为5ˊ-CTCGAGATTATTTGTCGAACAGATAATGGTTT-3ˊ。
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