[发明专利]过表达单一MicroRNA成熟体序列的新方法

权利要求书

1.一种表达单一microRNA成熟体的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供一种表达构建物，所述的表达构建物含有以下结构：

5’Seq_正向-Y-Seq_反向3’    (I)；

其中，Seq_反向为该单一microRNA成熟体相应的DNA序列；Seq_正向为与Seq_反向互补的序列；Y为位于Seq_正向和Seq_反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq_正向和Seq_反向不互补；式I所示的结构可形成如下所示的二级结构：

其中，“|”表示在Seq_正向和Seq_反向中，相应的核苷酸是配对的，在Seq_正向和Seq_反向之间形成氢键；表示在Seq_正向和Seq_反向中，相应的核苷酸不配对；并且，“|”和的分布构成了Seq_反向与Seq_正向的互补；

(2)将(1)的表达构建物转化细胞，从而表达单一microRNA成熟体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，式I所示的结构进入细胞并被胞内加工后，基于Seq_反向结构表达所述的单一microRNA成熟体，基于Seq_正向结构表达与另一microRNA成熟体不同的RNA，其不具备另一microRNA成熟体的活性。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，式(II)中，以Seq_正向为参照，存在于与该Seq_正向序列的特定位点上，该特定位点对应于所述另一microRNA成熟体发挥活性的关键位点。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，式(II)中，以Seq_正向为参照，存在于该序列的5’端第2-10位；且存在的个数为0-5个。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的Seq_正向具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；和/或

所述的Seq_反向具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；和/或

所述的Y具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，式(I)结构的序列选自：

SEQ ID NO：4中第8-60位所示核苷酸序列；或

SEQ ID NO：4中第8-62位所示核苷酸序列；或

SEQ ID NO：4中第6-62位所示核苷酸序列；或

SEQ ID NO：4中第5-66位所示核苷酸序列。

7.一种表达单一microRNA成熟体的表达构建物，所述的表达构建物含有以下结构：

5’Seq_正向-Y-Seq_反向3’    (I)；

其中，Seq反向为该单一microRNA相应的DNA序列；Seq_正向为与Seq_反向互补的序列；Y为位于Seq_正向和Seq_反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq_正向和Seq_反向不互补；式I所示的结构在可形成如下所示的二级结构：

其中，“|”表示在Seq_正向和Seq_反向中，相应的核苷酸是配对的，在Seq_正向和Seq_反向之间形成氢键；表示在Seq_正向和Seq_反向中，相应的核苷酸不配对；并且，“|”和的分布构成了Seq_反向与Seq_正向的互补。