[发明专利]一种启动子及其制备方法

权利要求书

1.一种启动子，其特征在于：为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列或为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO：1相同的作为启动子能力的核苷酸序列。

2.一种启动子，其特征在于：为能在高度严格条件下与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列杂交的核苷酸序列，或为能在高度严格条件下与对SEQ ID NO：1所示核苷酸序列进行一个或多个核酸的取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO：1相同的作为启动子能力的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述启动子，其特征在于：所述启动子来源于蝗绿僵菌的Magpd基因上游序列。

4.含权利要求1、2或3所述启动子的表达载体。

5.一种转化载体，含有权利要求1、2或3所述的启动子。

6.一种转化过的宿主或宿主细胞，含有权利要求1或2所述的启动子、或权利要求4所述的表达载体、或权利要求5所述的转化载体。

7.如权利要求6所述的转化过的宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞是真菌或真菌细胞。

8.如权利要求6所述的转化过的宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞是昆虫病原丝状真菌。

9.如权利要求6所述的转化过的宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞是蝗绿僵菌。

10.根据权利要求1-3任一项所述启动子的制备方法，包括如下步骤：

(1)培养蝗绿僵菌(Metarzhizium acridum)菌株CQMa102。

(2)从菌株中提取基因组DNA。

(3)用序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的引物从基因组DNA中扩增所述启动子序列。

11.根据权利要求10所述启动子的制备方法，包括如下步骤：

(1)将蝗绿僵菌(Metarzhizium acridum)菌株，在1/4SDAY液体培养基(葡萄糖10g/L，蛋白胨2.5g/L，酵母浸膏5.0g/L，pH值调至6.0)，28℃250rpm振荡培养3天

(2)用真菌基因DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

(3)根据蝗绿僵菌基因组序列(Genbank登录号ANDI00000000)，获取了Magpd基因组序列(Genbank登录号EFY84384.1)，用引物MgpdF和MgpdR引物，其序列见SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，扩增Magpd基因上游的所述启动子序列。

12.上述权利要求5所述的转化载体或权利要求6-9任一项所述宿主或宿主细胞的构建方法，包括以下步骤：

(1)将PMagpd启动子与目的基因可操作地连接；

(2)构建含有PMagpd启动子与目的基因的表达载体；

(3)将所述表达载体转化宿主，制得转化载体。