[发明专利]敲低小鼠内源性CYP3A酶的shRNA分子、重组表达载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.敲低小鼠内源性CYP3A酶shRNA分子，其特征在于：所述shRNA分子的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

2.权利要求1所述敲低小鼠内源性CYP3A酶shRNA分子的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体含有所述shRNA分子的编码序列，所述shRNA分子的编码序列如SEQ ID No.5所示，表达载体为慢病毒表达载体pPRIME-CMV-GFP-FF3。

3.权利要求2所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：制备所述shRNA分子的编码序列，然后插入慢病毒表达载体pPRIME-CMV-GFP-FF3，得重组表达载体pRIME-CMV-eGFP-miR-shRNA。

4.根据权利要求3所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，制备所述shRNA分子的编码序列，具体步骤为：以人工合成的如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列为模板，以SEQ ID No.3 和SEQ ID No.4所示序列分别为上、下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增条件为：95℃预变性5 分钟；94℃变性30 秒，66℃退火30秒，72℃延长40秒，30个循环；最后72℃延长8 分钟，得所述shRNA分子的编码序列。

5.根据权利要求4所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，所述重组表达载体的制备方法，具体步骤为：

将制备的所述shRNA分子的编码序列用限制性内切酶XhoI和EcoRI双酶切，同时用限制性内切酶XhoI和EcoRI双酶切所述慢病毒表达载体pPRIME-CMV-GFP-FF3，经琼脂糖凝胶电泳鉴定并回收酶切编码所述shRNA分子的核苷酸序列和所述慢病毒表达载体pPRIME-CMV-GFP-FF3骨架，然后将回收所述shRNA分子的编码序列与所述慢病毒表达载体pPRIME-CMV-GFP-FF3骨架在T4 DNA酶作用下16℃连接，得重组表达载体pRIME-CMV-eGFP-miR-shRNA。

6.权利要求2所述重组表达载体制备的慢病毒颗粒，其特征在于：所述慢病毒颗粒含有所述重组表达载体pRIME-CMV-eGFP-miR-shRNA。

7.权利要求1所述shRNA分子在敲低哺乳动物细胞CYP3A酶中的应用。

8.根据权利要求7所述shRNA分子在敲低哺乳动物细胞CYP3A酶中的应用，其特征在于，所述CYP3A酶为CYP3A11酶、CYP3A41酶和CYP3A44酶。

9.根据权利要求8所述shRNA分子在敲低哺乳动物细胞CYP3A酶中的应用，其特征在于：所述哺乳动物细胞为小鼠肝细胞。