[发明专利]玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增(LAMP)快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于玉米细菌性萎蔫病菌的恒温扩增快速检测试剂盒，其特征在于包括：(1)模板预处理反应液：3.2μM引物FIP，3.2μM引物BIP，0.4μM引物F3，0.4μM引物B3，800μM dNTP，1×Thermol Buffer，和ddH₂O；

所述引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP分别如SEQ ID NO：1、2、3和4所示；

(2)溶液Ⅰ：1×Thermol Buffer，0.64U/μL Bst DNA Polymerase，和ddH₂O；

所述1×Thermol Buffer成分为：20mM Tris-HCl，10mM KCl，10mM(NH₄)₂SO₄，2mM MgSO₄，0.01％Triton X-100，和ddH₂O，pH 8.8。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于引物FIP、BIP、F3与B3的终浓度比为：8∶8∶1∶1。

3.一种利用权利要求1或2所述试剂盒检测玉米细菌性萎蔫病菌的方法，其特征在于包括下列步骤：

(1)待检样品或细菌DNA的提取：

提取待检样品核酸，其中提取的样品DNA OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.6-2.0范围内，浓度在10-100ng/μL范围内；

(2)模板预处理：

将装有23μL模板预处理反应液的反应管加入2μL待检模板DNA于94℃水浴5min后迅速放入59℃的水浴中45s；然后94℃水浴25s和59℃水浴45s过程反复进行6个循环，产物用于LAMP模板；

(3)LAMP恒温扩增：

将上述经过处理的模板预处理混合溶液25μL加入25μL溶液Ⅰ中，63℃加热60min，80℃10min，降温至4℃；

(4)核酸凝胶电泳检测：

核酸扩增完成后，扩增结果在琼脂糖凝胶电泳检测，如果出现条带可以判断为阳性，否则为阴性。