[发明专利]同型半胱氨酸甲基转移酶及其核苷酸序列、重组载体、重组宿主细胞及制法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶，编码该酶的核苷酸序列，包括所述核苷酸序列的重组载体，包括所述重组载体的重组宿主细胞，从前述重组宿主细胞中纯化该酶的方法，以及包括上述酶、核苷酸序列、重组载体和重组宿主细胞中的至少一种的试剂盒。更具体地，本发明涉及一种同型半胱氨酸甲基转移酶，编码该同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列，包括所述核苷酸序列的重组载体，包括所述重组载体的重组宿主细胞，从前述重组宿主细胞中纯化该酶的方法，以及包括上述同型半胱氨酸甲基转移酶、核苷酸序列、重组载体和重组宿主细胞中的至少一种的试剂盒。 

背景技术

甲基转移酶是生命活动中起关键调节作用的酶，它可以将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的甲基转移到底物分子上，生成多种重要的含甲基生理活性物质，达到功能调节的目的。同型半胱氨酸甲基转移酶(EC 2.1.1.10)是甲基转移酶中的一种，可以用于同型半胱氨酸(HCY)生化诊断试剂的配制，是一种关键原料酶。 

现有的同型半胱氨酸甲基转移酶主要从酿酒酵母中提取，存在酶产率低，纯化困难、热稳定性差(保存温度超过40℃即完全失活)等缺点。 

发明内容

本发明的一个目的是克服现有的同型半胱氨酸甲基转移酶耐热性差、产率低纯化困难的缺点，提供一种耐热性好、产率高且容易纯化的同型半胱氨酸甲基转移酶。 

本发明的第二个目的是提供编码所述同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列。 

本发明的第三个目的是提供包括所述核苷酸序列的重组载体。 

本发明的第四个目的是提供包括所述重组载体的重组宿主细胞。 

本发明的第五个目的是提供包括上述同型半胱氨酸甲基转移酶、核苷酸序列、重组载体和重组宿主细胞中的至少一种的试剂盒。 

本发明的发明人付出了大量地创造性劳动，从白色念珠菌(Candida albicans SC5314)中得到本发明具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的同型半胱氨酸甲基转移酶，并且利用随机突变的方法得到本发明具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的同型半胱氨酸甲基转移酶。并且本发明的发明人意外地发现，所得两种同型半胱氨酸甲基转移酶都具有很好的耐热性，能在宽的温度范围内保持较高的稳定性。 

本发明提供了一种同型半胱氨酸甲基转移酶，其中，所述同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列为 

(1)SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或者 

(2)SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，或者 

(3)对(1)或(2)所述的氨基酸序列进行一个或几个氨基酸的缺失、添加和/或取代，但其同型半胱氨酸甲基转移酶的功能不变的氨基酸序列。 

本发明还提供了编码本发明所述同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列。 

本发明还提供了包括本发明所述核苷酸序列的重组载体。 

本发明还提供了包括本发明所述重组载体的重组宿主细胞。 

本发明还提供了从前述重组宿主细胞中纯化该酶的方法。 

本发明还提供了包括本发明所述的同型半胱氨酸甲基转移酶、核苷酸序列、重组载体和重组宿主细胞中的至少一种的试剂盒。 

本发明提供的同型半胱氨酸甲基转移酶具有耐热性好的优点。参见图3可知，本发明的两种同型半胱氨酸甲基转移酶在40℃下于pH6.0的缓冲液中静置15分钟后仍都具有60％以上的相对活性，其中，本发明具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的同型半胱氨酸甲基转移酶在45℃下于pH6.0的缓冲液中静置15分钟后仍都具有50％以上的相对活性。 

附图说明

图1实施例1的同型半胱氨酸甲基转移酶基因纯化的琼脂糖凝胶鉴定照片； 

图2实施例1的同型半胱氨酸甲基转移酶在IPTG诱导后表达与纯化的SDS-PAGE鉴定照片，其中，M泳道为分子量标记，第1泳道为未受IPTG诱导的蛋白表达，第2泳道为IPTG诱导后的蛋白表达，从中明显可以看出，在第2泳道中，目标蛋白质同型半胱氨酸甲基转移酶得到了大量表达； 

图3实施例1和2同型半胱氨酸甲基转移酶热稳定性图。 

具体实施方式

本发明提供了一种同型半胱氨酸甲基转移酶，其中，所述同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列为 

(1)SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或者 

(2)SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，或者