[发明专利]同型半胱氨酸甲基转移酶及其核苷酸序列、重组载体、重组宿主细胞及制法和试剂盒有效
申请号: | 201110343641.3 | 申请日: | 2011-11-03 |
公开(公告)号: | CN102391999A | 公开(公告)日: | 2012-03-28 |
发明(设计)人: | 不公告发明人 | 申请(专利权)人: | 北京利德曼生化股份有限公司 |
主分类号: | C12N9/10 | 分类号: | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C12N1/21;C12Q1/48;C12Q1/68 |
代理公司: | 北京银龙知识产权代理有限公司 11243 | 代理人: | 金鲜英;冯云 |
地址: | 100176 北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 半胱氨酸 甲基转移酶 及其 核苷酸 序列 重组 载体 宿主 细胞 制法 试剂盒 | ||
1.一种同型半胱氨酸甲基转移酶,其特征在于,所述同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列为
(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,或者
(2)SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列,或者
(3)对(1)或(2)所述的氨基酸序列进行一个或几个氨基酸的缺失、添加和/或取代,但其同型半胱氨酸甲基转移酶的功能不变的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸甲基转移酶,其中,所述同型半胱氨酸甲基转移酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
3.一种编码同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列为编码权利要求1或2所述的同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的核苷酸序列,其中,所述核苷酸序列为
(1)SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列;或者
(2)SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列;或者
(3)对SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列进行一个或几个核苷酸取代、缺失或增加而得到的核苷酸序列,该核苷酸序列编码的同型半胱氨酸甲基转移酶功能不变。
5.根据权利要求3所述的核苷酸序列,其中,所述核苷酸序列为SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。
6.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体由空载体和插入该空载体的目的基因组成,所述目的基因为权利要求3-5中任意一项所述的编码同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列。
7.根据权利要求6所述的重组载体,其特征在于,所述空载体选自由pET系列载体、pUC19、pGEM和pBluescript所组成的载体组中。
8.一种重组宿主细胞,其特征在于,所述重组宿主细胞含有权利要求6或7所述的重组载体。
9.根据权利要求8所述的重组宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)、BL21、TOP10或者DH5a。
10.一种从权利要求8或9所述的重组宿主细胞中纯化同型半胱氨酸甲基转移酶的方法,其特征在于,所述方法采用将重组细胞的破碎液在40-45℃加热15-40分钟,然后在8000-15000rpm离心10-20min,以除去不耐热的杂蛋白。
11.一种检测血清同型半胱氨酸的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括以下(a)-(d)中的至少一种:
(a)权利要求1或2所述的同型半胱氨酸甲基转移酶;
(b)权利要求4-6中任意一项所述的同型半胱氨酸甲基转移酶的核苷酸序列;
(c)权利要求6或7所述的重组载体;
(d)权利要求8或9所述的重组宿主细胞。
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