[发明专利]一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体是一种利用金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法。

背景技术

金线莲[Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lindl.]为兰科开唇兰属(金线莲属)多年生草本植物。该属植物有40多种，分布于亚洲热带地区至大洋洲，我国20种，2个变种。金线莲为名贵中草药，享有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美誉，在我国经典医学书籍《本草求源》和《国药大药典》等均有记载。金线莲种子在自然条件下萌发率极低，资源再生较慢，加上长期采挖，种质资源稀缺，已濒临灭绝，难以满足市场需求。广西金线莲是我国分布的3个主要野生居群之一，是行业公认的品质最优的药材，被视为药材珍品。目前已有的研究多以福建、广东和台湾金线莲为主，且主要以茎段为外植体材料进行繁殖，未见有关利用广西金线莲蒴果快速繁育种苗的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法，本方法不仅可以进行工厂化生产以满足市场需求，而且能有效保护野生资源。

本发明一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法，包括如下步骤：

（1）蒴果成熟度的选择：将野外采集的金线莲植株引种在人工资源圃内，于花期选择优良株系进行人工授粉和果实培育，金线莲蒴果在成熟过程中，内部种胚的颜色由乳白色浆状逐渐转变成金黄色的丝状，其中以人工授粉后生长120~150天的未开裂蒴果为最佳材料；

（2）种子的萌发培养：将选取的蒴果材料经外表灭菌处理后，取出内部的种胚，均匀的撒播到萌发培养基上，在温度24~28℃、光照强度20μmol·m^-2·s^-1、光照时间12 h/d的条件下，培养25天后，种子萌发形成原球茎；

（3）原球茎的分化：将播种后形成的原球茎及时转入分化培养基中，在温度24~28℃、光照强度30 μmol·m^-2·s^-1、光照时间12 h/d的条件下，培养20~30天，原球茎分化形成带叶的芽苗；

（4）分化苗的增殖及壮苗培养: 将原球茎分化的幼嫩芽苗转入转接到增殖及壮苗培养基里，在温度24~28℃、光照强度40μmol·m^-2·s^-1、光照时间12 h/d的条件下，培养约30天可培养出4~6cm高的健壮大苗；

（5）生根培养: 经已分化的广西金线莲芽苗转接到生根培养基上，在温度24~28℃、光照强度40μmol·m^-2·s^-1、光照时间12 h/d的条件下，培养约35天可培养出5cm高以上根系发达的完整大苗；

（6）驯化及移栽：经过生根培养的健壮大苗，待根系生长发达后，便可进行出瓶移栽。出瓶前，将试管苗转移到温室大棚内炼苗15~20天，然后将试管苗从瓶中取出，小心地将根部附着的培养基洗净，待植株表面水分稍干便可种植。腐殖土或塘泥均可作为移栽基质，移栽后保持温度为22~28℃，湿度为75% ~80%，成活率达到95％以上。

所述蒴果消毒是将外植体在流动的自来水下冲洗干净后，置于超净工作台上用70%的酒精浸泡60秒，再用0.1%的HgCl₂消毒8分钟，取出用无菌水浸洗5次，用无菌滤纸吸干材料表面水分。

步骤（2）中所述萌发培养基为MS+AC1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。

步骤（3）中所述原球茎分化培养基为MS+马铃薯汁200g/L +AC1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH 5.8。

步骤（4）中所述增殖及壮苗培养基为MS+香蕉汁100g/L +AC1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH 5.8

步骤（5）中所述生根培养基为1/2MS+NAA0.5~1.0mg/L+蔗糖20g/L +琼脂6.0g/L，pH 5.8。

 本发明的优点在于：本发明以金线莲蒴果为外植体，通过种子→原球茎→完整植株→移栽的途径快速繁育种苗，建立了金线莲蒴果快速繁殖再生体系，该体系中种子和原球茎使用无激素培养，原球茎不经过继代培养直接分化成苗，形成完整的小植株。该方法具有生长周期短、生产成本低、品质好、可规模化生产种苗的特点；另外，利用该方法繁殖的金线莲种苗，避免了衰退、变异等问题的发生，有利于保持种苗的优良性状，提高种苗使用的安全性，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响。

具体实施方式