[发明专利]一种简便高效提取紫杉醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于紫杉醇的提取方法。

背景技术

红豆杉，学名Taxus chinensis(pilger)Rehd.；俗称紫杉，属植物界，裸子 植物门，红豆杉纲(紫杉纲)，红豆杉目，红豆杉科，红豆杉属。紫杉醇是从红豆杉中 提取出来的一种具有抗癌作用的新物质。紫杉醇的主要成分是由三个主环构成的二萜 核和一个苯异丝氨酸侧链，分子式为C₄₇H₅₁NO₁₄，分子量为853.92，结构式如下：

目前，关于我国从红豆杉中获得紫杉醇的专利大致两类：提取和提纯。从红豆 杉中提取紫杉醇基本分为5种：甲醇提取法，乙醇提取法，细胞培养法，生物酶解法， 超临界二氧化碳法；其中，应用最多的是乙醇提取法，其次是甲醇提取法和细胞培养 法。一般情况下，用低级醇提取紫杉醇时，使用甲醇或者乙醇两者都可以，但由于甲 醇有毒，有一些专利是以无毒提取紫杉醇为重点，所以只选用乙醇而不用甲醇作为提 取溶剂，提取后的分离纯化方法大同小异。20世纪90年代的提取法纯度偏低，需要 进一步提纯；但近些年很多专利直接从红豆杉中提取出紫杉醇的纯度已经达到99.5％ 以上，所以之前关于提纯的专利已经被灵活的运用到提取步骤中。

在用乙醇从红豆杉药材中提取紫杉醇时，提取物中含有大量的糖类等水溶性杂 质，如不处理，将直接影响到下一步纯化效率，以往的专利和文献报道多数采用萃取 法，即将乙醇提取物用二氯甲烷溶解，再用水进行萃取除杂，萃取次数较多，操作起 来也很繁杂，虽然可以去上述杂质，但经我们实验验证，紫杉醇的损失量较大，而且 在实验中需用大量的二氯甲烷有机溶剂，在工业化生产中使用受到很限制，增加成本， 安全性低，不适合大工业生产。

发明内容

本发明提供一种简便高效提取紫杉醇的方法，以解决紫杉醇提取率低及不适合大 工业生产的问题。

本发明采取的技术方案是，包括以下步骤：

(1)将1000g红豆杉干燥药材粉碎成粗粉，过20目筛，用超临界CO₂萃取法去 除脂溶性杂质，萃取温度：40-60℃，萃取压力：25-35MPa，萃取时间1-3h，不含夹 带剂；

(2)药渣加入纤维素酶8-12g，加水8-12L，60-70℃下水解20-30小时；

(3)过滤，药渣干燥后，用5-12倍量乙醇浸提，浸提方法采用渗漉法或回流提 取法；

(4)过滤，35-60℃减压回收乙醇至残留物无醇味；

(5)将残留物用2倍～4倍水洗1-2遍，弃去水洗液，滤渣在40℃-60℃干燥；

(6)层析法制备紫杉醇：可将上述干燥滤渣，上氧化铝或硅胶柱层析，先用二 氯甲烷洗脱去杂质，再用5％甲醇二氯甲烷溶液(V/V)洗至无紫杉醇流出，收集此洗 脱液，回收溶剂后，残留物低温干燥后，再利用反相色谱柱层析及制备液相色谱制备 紫杉醇。

本发明所述渗漉提取法步骤为：将上述药渣装入渗漉筒中，用95％乙醇作溶剂， 首先浸泡12-48小时，然后由下口开始流出渗漉液，渗漉筒上口不断添加新溶剂，至 无紫杉醇为止，溶剂始终保持浓度差。

本发明所述回流提取法步骤为：以95％乙醇为提取溶剂，将药渣置于回流装置中 加热进行提取，加热温度75-85℃，提取时间6-10小时，反复回流操作2～4次。

本发明的特点在于(1)加酶水解可提高紫杉醇的提取率，同时还可去除部分多 糖等水溶性杂质；(2)清水洗涤红豆杉乙醇提取物，可以去除大量的糖类等水溶性杂 质，而紫杉醇的含量未受影响，用水量少，避免了溶剂萃取法中使用有机溶剂，减轻 了上柱的压力，更加适合大工业生产。