[发明专利]一种防治骨质疏松中药护骨胶囊的有效成分的检测方法

权利要求书

1.一种防治骨质疏松中药护骨胶囊的有效成分的检测方法，所述护骨胶囊的中药组方为何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、续断、骨碎补、当归和山药，其特征在于：所述护骨胶囊的有效成分的检测方法是利用多波长的高效液相色谱法检测护骨胶囊中的各种有效成分，具体的步骤是：

a、配制待检样品溶液：取护骨胶囊内容物，用溶剂配制成含药物4mg/ml～20mg/ml的待检样品溶液；

b、配制混合对照品溶液：取2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、淫羊藿苷、绿原酸、柚皮苷混合后用溶剂配制成各成分浓度均为1μg/ml～200μg/ml的对照品溶液；

c、然后将待检样品溶液和混合对照品溶液分别按以下方法进行高效液相色谱检测：

以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，按进样量为1μL～20μL进样，柱温为10℃～40℃，用由F相、G相和H相组成的流动相以0.3ml/min～1.5ml/min的流速进行梯度洗脱，同时采用检测波长为267nm～273nm、280～286nm、317nm～323nm和322nm～328nm的紫外光多波长检测，获得待检样品溶液和混合对照品溶液的高效液相色谱图；

d、将待检样品溶液的高效液相色谱图与混合对照品溶液的高效液相色谱图比较，与混合对照品溶液的高效液相色谱图中相应成分的保留时间相同的峰即是与该成分相同物质的特征峰，并根据峰面积按外标法计算含量；

其中，所述梯度洗脱步骤为：0分钟，流动相中F相的体积百分比为5%～20%，流动相中G相的体积百分比为90%～60%，流动相中H相的体积百分比为5%～20%；2分钟～7分钟，F相为5%～20%，G相为90%～60%，H相为5%～20%；5分钟～14分钟，F相为7%～30%，G相为86%～40%，H相为7%～30%；10分钟～23分钟，F相为11%～35%，G相为78%～30%，H相为11%～35%；15分钟～35分钟，F相为15%～40%，G相为70%～20%，H相为15%～40%；20分钟～55分钟，F相为20%～45%，G相为60%～10%，H相为20%～45%；其中，以上百分比均为体积百分比；

其中，所述混合对照品溶液的高效液相色谱图中各峰依次为绿原酸、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、柚皮苷、淫羊藿苷的特征峰。

2.根据权利要求1所述的一种防治骨质疏松中药护骨胶囊的有效成分的检测方法，其特征在于：所述配制待检样品溶液和混合对照品溶液所用的溶剂可为：10%～95%的乙醇、10%～100％的甲醇或者是与流动相相同的溶剂。

3.根据权利要求1所述的一种防治骨质疏松中药护骨胶囊的有效成分的检测方法，其特征在于：所述流动相的F相是甲醇；所述流动相的H相是乙腈；所述流动相的G相是0.1%～2%的醋酸。

4.根据权利要求3所述的一种防治骨质疏松中药护骨胶囊的有效成分的检测方法，其特征在于：所述G相的制备方法是：往分析纯的冰醋酸中加入水配制成0.1%～2%的醋酸。

5.根据权利要求1所述的一种防治骨质疏松中药护骨胶囊的有效成分的检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱步骤为：0分钟，流动相中F相的体积百分比为7%～15%，流动相中G相的体积百分比为86%～70%，流动相中H相的体积百分比为7%～15%；3分钟～6分钟，F相为7%～15%，G相为86%～70%，H相为7%～15%；6分钟～12分钟，F相为9%～20%，G相为82%～60%，H相为9%～20%；12分钟～20分钟，F相为14%～25%，G相为72%～50%，H相为14%～25%；20分钟～30分钟，F相为20%～30%，G相为60%～40%，H相为20%～30%；30分钟～45分钟，F相为25%～35%，G相为50%～30%，H相为25%～35%；其中，以上百分比均为体积百分比。