[发明专利]提高甜高粱燃料乙醇废酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸和超氧化物歧化酶含量的方法

权利要求书

1.提高甜高粱燃料乙醇废酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸和超氧化物歧化酶含量的方法，其特征是包括如下步骤：

(1)酿酒酵母和甜高粱茎秆汁经20-38小时发酵生产燃料乙醇后，取出废酿酒酵母液，经3000-5000rpm，离心5-15分钟，得到湿废酵母菌体；

(2)按比例取40-60g所述湿废酵母菌体，20-50g葡萄糖，0.5-4g甲硫氨酸，0.005-0.015g硫酸铜，0.03-0.06g硫酸锌，加入直接压榨的新鲜的总糖质量含量为13-20％的甜高粱茎秆汁至1L混匀；在pH＝5.0、通空气量为0.8-1.5vvm、搅拌转速为120-160rpm及温度为30℃-34℃条件下，活化培养20-40小时，得到活化发酵液；

(3)将所述活化发酵液以3000-5000rpm，离心5-15分钟，弃上清液，得到活化后湿酵母菌体；

(4)取所述活化后湿酵母菌体，加入6-12倍体积的1.5mol/L高氯酸水溶液，冰浴条件下，搅拌破壁1-2小时，3000-5000rpm，离心5-15分钟，分离得到SAM上清液；

或取所述活化湿酵母菌体，加入8-10倍体积的体积浓度为70-90％的异丙醇水溶液，在冰浴中搅拌1-2小时进行破壁，以4000-6000rpm，离心5-15min，弃去上清，得到沉淀；加入2-4倍沉淀质量的pH＝7.8，浓度为0.05mol/L的K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液，搅拌提取1-3个小时，以4000-6000rpm，离心5-15min，得到SOD上清液，所述SAM为S-腺苷-L-甲硫氨酸，所述SOD为超氧化物歧化酶。

2.根据权利要求1所述的提高甜高粱燃料乙醇废酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸和超氧化物歧化酶含量的方法，其特征是所述步骤(1)为：将甜高粱茎秆经24-30小时发酵生产燃料乙醇后，取出废酿酒酵母液，经4000rpm，离心10分钟，得到湿废酵母菌体。

3.根据权利要求1所述的提高甜高粱燃料乙醇废酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸和超氧化物歧化酶含量的方法，其特征是所述步骤(2)为：按比例取50g所述湿废酵母菌体，30g葡萄糖，2g甲硫氨酸，0.010g硫酸铜，0.04g硫酸锌，加入直接压榨的新鲜的总糖质量含量为15％的甜高粱茎秆汁至1L混匀；在pH＝5.0、通空气量为1.2vvm、搅拌转速为140rpm及32℃活化培养30小时，得到活化发酵液。

4.根据权利要求1所述的提高甜高粱燃料乙醇废酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸和超氧化物歧化酶含量的方法，其特征是所述步骤(3)为：将所述活化发酵液以4000rpm，离心10分钟，弃上清液，得到活化湿酵母菌体。

5.根据权利要求1所述的提高甜高粱燃料乙醇废酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸和超氧化物歧化酶含量的方法，其特征是所述步骤(4)为：取所述活化湿酵母菌体，加入8倍体积的1.5mol/L高氯酸水溶液，冰浴条件下，搅拌破壁1.5小时，4000rpm，离心10分钟，分离得到SAM上清液；

或取所述活化湿酵母菌体，加入9倍体积的体积浓度为80％的异丙醇水溶液，在冰浴中搅拌1.5小时进行破壁，以5000rpm，离心10min，弃去上清，得到沉淀；加入3倍沉淀质量的pH＝7.8，浓度为0.05mol/L的K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液，搅拌提取2个小时，以5000rpm，离心10min，得到SOD上清液。