[发明专利]利用药物松胞素B检测淋巴细胞转化的方法无效
| 申请号： | 201110333552.0 | 申请日： | 2011-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN102505039A | 公开（公告）日： | 2012-06-20 |
| 发明（设计）人： | 邵春林;袁德晓;潘燕;叶爽;张江虹;白杨 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;盛志范 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 药物 松胞素 检测 淋巴细胞 转化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用药物松胞素B检测淋巴细胞转化的方法，其特征在于具体步骤为：
（1）取若干份健康人外周血，每份血分成照射组（免疫抑制组）和非照射组；
（2）血样用含PHA营养液培养：无菌操作将0.2-0.6ml血样加入含有PHA营养液小瓶内，PHA终浓度为30-70μg/ml，混匀后，置37℃温箱培养1-2天；
（3）加入松胞素B继续培养：在含PHA营养液中培养结束后，向培养液内加入松胞素B，终浓度为2-6μg/ml，37℃温箱继续培养24-36h；
（4）溶解红细胞：培养结束后，吸弃上清液，加入37℃预温的0.87% NH4Cl溶液3-5ml，置37℃温箱孵育10-15min；
（5）低渗处理：离心弃上清后每管细胞加入5-10ml 0.075M KCl混匀，室温低渗10-20min；
（6）固定液固定：采用两步固定法，低渗后加入固定液（固定液：低渗液=1：5-8），滴管混匀后立即离心；弃上清每管加入5-8ml固定液固定20-30min；所述固定液为甲醇和冰醋酸的混和液，按质量比，甲醇：冰醋酸=7-9：1；
（7）检测照射与非照射淋巴细胞的双核率的差异，双核率=双核细胞数/N，N为观察淋巴细胞个数，N取500—1000。
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