[发明专利]一种信号增强型免疫层析金标试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种信号增强型免疫层析金标试纸条，其特征在于：金标试纸条包括塑料衬板，所述塑料衬板上分别依次粘贴有样品玻璃纤维膜，免疫探针金标垫，信号扩增金标垫，硝酸纤维膜和吸水玻璃纤维膜五种粘贴物；相邻粘贴物之间重叠部分的长度为2 mm，干燥封装，温度4℃～常温条件下保存。

2.一种信号增强型免疫层析金标试纸条的制备方法，其特征在于具体制备操作步骤如下：

（1）目标检测物金标免疫探针的制备

选取粒径为30～40nm的胶体金溶液，用浓度为0.1 M的碳酸钾（K₂CO₃）溶液调节胶体金溶液的pH值至8.5～9.5，得调节后胶体金溶液A；

将浓度为1mg～2 mg /mL的兔抗目标检测物抗体溶液与浓度为1 mg～2 mg /mL的牛血清白蛋白（BSA）溶液以摩尔比1：100混合，得混合溶液；

取混合溶液10 μL加入到1 mL调节后胶体金溶液A中，室温下振荡反应15min； 

在温度4℃条件下，以10000 rpm的速度离心20 min，去除上清未结合的抗体和牛血清白蛋白（BSA）；

将离心得到的沉淀重新分散于磷酸缓冲溶液（PBS）中，得到目标检测物金标免疫探针；（2）金标信号扩增探针的制备

选取粒径为15～20 nm的胶体金溶液，用浓度为0.1 M的碳酸钾（K₂CO₃）溶液调节胶体金溶液的pH值至8.5～9.5，得调节后胶体金溶液B；

以1：1000～1：3000的标记比例将浓度为1mg/mL的牛血清白蛋白（BSA）抗体溶液加入到调节后胶体金溶液B中，室温下反应15min；温度4℃条件下，以10000 rpm的速度离心20 min后，去除上清中未结合的牛血清白蛋白（BSA）抗体；

将离心得到的沉淀重新分散于磷酸缓冲溶液（PBS）中，得到金标信号扩增探针；

（3）目标检测物免疫探针金标垫和目标检测物信号扩增金标垫的制备

将目标检测物金标免疫探针和金标信号扩增探针分别喷涂到两块玻璃纤维膜上，得到目标检测物免疫探针金标垫和目标检测物信号扩增金标垫；

（4）具有检测线和参照线的硝酸纤维膜的制备

在一块硝酸纤维膜上用浓度为1mg/mL的目标检测物-卵清蛋白偶联物溶液和浓度为1mg/mL的羊抗兔抗体溶液分别画两条线平行的线，目标检测物-卵清蛋白偶联物划线作为检测线，羊抗兔抗体溶液划线为参照线；

（5）信号增强型免疫层析金标试纸条的制备

将样品玻璃纤维膜、目标检测物免疫探针金标垫、目标检测物信号扩增金标垫、具有检测线和参照线的硝酸纤维膜和吸水玻璃纤维膜五种粘贴物分别依次粘贴到塑料衬板上；相邻粘贴物之间的重叠部分的长度为2 mm，得到信号增强型超灵敏检测金标试纸条，干燥封装，温度4℃～常温条件下保存。

3.根据权利要求2所述的一种信号增强型免疫层析金标试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤1中的兔抗目标检测物抗体为兔抗双酚A抗体，兔抗邻苯二甲酸酯抗体或兔抗莱科多巴胺抗体。