[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、伪狂犬病的三联活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种疫苗组合物，含有猪繁殖与呼吸综合征疫苗，猪瘟疫苗及伪狂犬病疫苗。

2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗，猪瘟疫苗及伪狂犬病疫苗之间无免疫抑制。

3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗、所述猪瘟疫苗及所述伪狂犬病疫苗的TCID50值的比例为1∶4∶1。

4.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有Nsp1核苷酸序列，所述序列的编码序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的同源性。

5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗进一步含有Nsp2核苷酸序列，所述Nsp2核苷酸的编码序列与SEQ ID NO：2具有至少90％的同源性。

6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有由SEQ ID NO：1编码的Nsp1核苷酸序列，且含有由SEQ ID NO：2编码的Nsp2核苷酸序列。

7.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有猪繁殖与呼吸综合征病毒的核苷酸序列，该序列的编码序列与SEQ ID NO：3具有至少90％的同源性。

8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有猪繁殖与呼吸综合征病毒的核苷酸序列，该序列由SEQ ID NO：3编码。

9.根据权利要求1-8任一所述的疫苗组合物，其中所述猪瘟疫苗的编码序列与SEQ ID NO：9具有至少80％的同源性。

10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其中所述猪瘟疫苗的编码序列如SEQ ID NO：9所示。

11.根据权利要求1-10任一所述的疫苗组合物，其中所述伪狂犬病疫苗编码序列与NCBI参考号NC_006151的核苷酸序列至少具有80％的同源性。

12.根据权利要求11所述的疫苗组合物，其中所述伪狂犬病疫苗编码序列如NCBI参考号NC_006151的核苷酸序列所示。

13.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物，其进一步含有佐剂。

14.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物，其进一步含有稳定剂。

15.根据权利要求14所述的疫苗组合物，其中所述稳定剂包括蔗糖、L-谷氨酸钠、或水解乳蛋白。

16.一种制备权利要求1或2所述的疫苗组合物的方法，包括：

(1)将细胞系进行传代和培养；

(2)将猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗、猪瘟疫苗及伪狂犬病疫苗分别接种易感细胞，用维持液培养，制备生产种毒；

(3)将所制备的生产种毒分别接种长满90-100％细胞的介质上，用维持液培养增殖得到猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗抗原液、猪瘟疫苗抗原液及伪狂犬病疫苗抗原液；

(4)将猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗抗原液、猪瘟疫苗抗原液及伪狂犬病疫苗抗原液与稳定剂充分混合。

17.按照权利要求16所述的方法，其特征在于：步骤(1)、(2)、(3)中所述的用于生长猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的细胞为Marc-145细胞系、MA-104细胞系、Vero细胞系、DL-2621细胞系等传代细胞系或PAM细胞等原代细胞。

18.按照权利要求16所述的方法，其特征在于：步骤(1)、(2)、(3)中所述的用于生长猪瘟疫苗的细胞为BT细胞系、Vero细胞系、MPK细胞系、SK6细胞系、PK2a细胞系、CPK细胞系、RKC细胞系、MDBK细胞系、MDCK细胞系、CRFK细胞系、PT细胞系和ST细胞系等传代细胞系或BT细胞等原代细胞。

19.按照权利要求16所述的方法，其特征在于：步骤(1)、(2)、(3)中所述的用于生长伪狂犬疫苗的细胞为Marc-145细胞系、MDBK细胞系、BT细胞系。