[发明专利]草莓的茎尖离体快速培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种草莓的茎尖离体快速培养方法，利用当年抽生的匍匐茎上的茎尖生长点经消毒后诱导丛生芽，再经过培养后得到完整的试管苗，属于草莓培养方法技术领域。

背景技术

草莓是一种优质高档水果，营养丰富，经济价值高。长久以来，草莓的繁殖方式一直以分株繁殖和腋芽扦插繁殖为主，但这些传统的繁殖方式很容易使草莓感染病毒，使其产量和质量下降，无法满足生产用种苗之需。

发明内容

本发明的目的是提供一种繁殖率高、繁殖速度快、繁殖效果优异的草莓培养方法。

为了达到上述目的，本发明提供了一种草莓的茎尖离体快速培养方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：选取草莓当年萌发的匍匐茎，冲洗干净，消毒备用；

第二步：将消毒干净的草莓匍匐茎在解剖镜下切取0.1～0.5mm长的茎尖，接种于发生培养基中进行生芽培养，待茎尖上长出0.5～1.5cm长的新芽后，将新芽切下，接种到增殖培养基中进行丛生芽诱导，其中，所述发生培养基是在MS培养基的基础上添加了6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA），所述增殖培养基是在MS培养基的基础上添加了6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、激动素（KT）和吲哚丁酸（IBA）；

第三步：将丛生芽切成单芽，接种于生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了萘乙酸（NAA）；

第四步，将生根的试管苗移入由质量比为4～6：1的珍珠岩和泥炭混合而成的基质中，浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿，5～9天后揭开薄膜逐步炼苗，每天叶面喷水2～3次，10～20天后施加肥料液，50～70天后将幼苗移至灌满纯泥炭的塑料穴盘，浇水后用塑料薄膜覆盖保温保湿，经1.5～2.5个月培养后直接移栽至大田中。

优选地，所述第一步中的消毒的具体操作为：在超净工作台上先用70～80vol%乙醇溶液消毒，然后用0.05～0.15vol%的洁尔敏溶液消毒，最后用0.05～0.15vol%氯化汞溶液消毒，用无菌水冲洗，再用无菌滤纸吸干水分。

优选地，所述发生培养基中6-苄基氨基嘌呤的浓度为1～3mg/L，萘乙酸的浓度为0.1～0.3mg/L，pH值为5～6。

优选地，所述增殖培养基中6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.1～1.0mg/L，激动素的浓度为0.1～0.3mg/L，吲哚丁酸的浓度为0.1～0.3mg/L。

优选地，所述生根培养基中萘乙酸的浓度为0.1～1.0mg/L。

所述第一步中生芽培养是在20～30℃、光照强度2000～3000LX以及光照时间8～16小时/天的条件下进行。

所述第二步中丛生芽诱导是在20～30℃、光照强度3000～4000LX以及光照时间8～16小时/天的条件下进行。

所述第二步进行丛生芽诱导后进行继代增殖，每30-35天增殖一次，增殖率为1：3-4。

所述第三步中生根培养是在20～30℃、光照强度3000～4000LX，光照时间8～16小时/天的条件下进行。

所述第四步中用到的肥料液中含有0.05～0.15wt%硝酸铵和0.05～0.15wt%磷酸二氢钾。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1、脱毒率高（采用解剖镜下剥取0.3mm大小茎尖），茎尖生长快，茎尖发生率高，一般高达96%。繁殖率高，繁殖速度快，可以在短时期内工厂化生产种苗。

2、试管苗生长旺盛，可消除“玻璃化”现象。

3、试管苗生根率高，一般可达99%。

具体实施方式

下面结合实施例来具体说明本发明。

实施例1

MS培养基成分如下：

注：1/2MS培养基是将上述大量元素和微量元素减半，其他成分不变配制得到。

草莓的茎尖离体快速培养方法，具体步骤如下：

第一阶段：发生材料清洗消毒。选取草莓当年萌发的匍匐茎，用洗涤剂冲洗干净，在流水下冲洗2小时。在超净工作台上先用75vol%乙醇溶液消毒1分钟，然后用0.1vol%的洁尔敏溶液消毒15分钟，最后用0.1vol%氯化汞溶液消毒15分钟，用无菌水冲洗三遍，无菌滤纸吸干水分；