[发明专利]一种提高乳酸菌冻干活性的方法

说明书

技术领域

一种提高乳酸菌冻干活性的方法，属于酸奶冻干发酵剂、乳酸菌活菌制剂技术领域。

背景技术

由于成本和工业化方面的问题，菌体收集最常用的方法是离心分离法，即借助离心机的离心力作用使菌体沉积，目的就是将菌体与培养基和代谢产物分开，且要尽可能减少对菌体的损伤，此类方法简便、快速、处理量大，适合商业化生产。

菌体经过富集培养、离心收集和保护剂悬浮后，一般采取的措施就是迅速于低温下预冻，预冻一定时间后就开始冷冻干燥。从保护剂悬浮菌体到预冻这一步，可以做的工作很多：Broadbent等指出将乳酸乳球菌置于10℃冷激2h，能提高细胞冻融后的存活率。国内关于这方面的研究才刚起步，东北农大的张兰威等人发表过一篇综述。国外有文献报道的也仅限于对大肠杆菌和一些嗜温乳酸菌关于冷激方面的研究。关于德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌这两种常用于酸奶发酵剂菌种进行预培养的研究还未见诸报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高乳酸菌冻干活性的方法，在菌体经过富集培养，离心收集和保护剂悬浮后，先不置于低温下预冻，而是把悬浮菌体重新送回一定温度培养一定时间，然后再冷冻干燥。本发明把这种处理方法称为预培养。预培养对前面的离心收集过程使菌体造成的损伤有修复作用，所以能提高乳酸菌冻干活性。本发明根据微生物的生理代谢特点，引入了预培养的思路，最大限度的挖掘冻干酸奶发酵剂活性提高的关键控制点。

本发明的技术方案：酸奶发酵剂主要由德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌两种菌构成。

将这两种菌分别或按照1∶1的配比以2％接入发酵培养基中培养，用常规方法经过富集培养，离心后收集菌体，加入保护剂悬浮，保护剂的用量是菌体湿重量的10-15倍，加保护剂悬浮后的乳酸菌菌体于4℃放置平衡30min，在30-45℃温度下，经过30-120min时间的预培养后，再进行冷冻干燥。

本发明所用乳酸菌菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种CTCC6047、嗜热链球菌CTCC6038或以上两个菌种按质量比1∶1混合菌种。

本发明所用保护剂为：8g脱脂奶粉、29甘油、0.5g酵母膏，加水100mL充分混合溶解。

本发明所用保护剂应于115℃、15min条件下灭菌，灭菌后置于37℃下培养三天，确认无菌后才能使用。

预培养的温度优选为42℃，预培养的时间优选为60分钟，本方法也适用于乳酸菌活菌制剂或酸奶发酵剂。

本发明的有益效果：采用预培养方式可以修复离心过程中对菌体造成的损伤，所以能提高乳酸菌冻干活性。本发明对于用作酸奶发酵剂乳酸菌，可以缩短凝乳时间。菌体经过预培养过程，由冷冻干燥前的不活跃状态又能回复到富集培养后的相对活跃状态。所选菌株最适预培养温度为42℃，最适预培养时间为60min。将此种状态的菌体冻干后，菌体活性显著提高，凝乳时间比对照组缩短25min。

菌体用保护剂悬浮后不能马上冷冻，保护剂与菌体细胞平衡需要一段时间。保护剂与菌体在4℃放置30min以上平衡完成。

经过稳定性实验表明，预培养的细胞稳定性比对照组要好。前者于4℃的条件下贮藏90天后，凝乳时间损失36％；而对照组损失62％。

具体实施方式

实施例1