[发明专利]一种聚乙二醇-集成干扰素变异体冻干制剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种聚乙二醇-集成干扰素变异体冻干制剂，属于药物制剂领域。

背景技术

早在1957年，lssacs等人发现病毒感染的细胞产生一种因子，可抵抗病毒的感染，干扰病毒的复制，因而命名为干扰素（interferon,IFN）。干扰素是由灭活的或活的病毒作用于易感细胞后，由易感细胞基因组编码而产生的一组糖蛋白。其活性及抗原性皆取决于分子中的蛋白质，而与其糖基无关。根据其来源和结构，可将IFN分为IFN-α、IFN-β、IFN-γ，它们分别由白细胞、纤维母细胞和活化T细胞产生。IFN-α为多基因产物，有十余种不同亚型，但它们的生物活性基本相同。IFN除有抗病毒作用外，还有抗肿瘤、免疫调节、控制细胞增殖及引起发热等作用。目前临床上使用的干扰素大多是通过基因重组技术得到的。

IFN是慢性病毒性肝炎经临床验证有效的一线治疗药物。临床使用较多的是天然结构的IFNα-2a和IFNα-2b。二者均属于短效干扰素，半衰期短(4～16 h)，血清浓度在注射24 h后已经很低。其在体内的药代动力学过程影响了其抗病毒治疗的远期疗效。按照目前3~6MU/kg，每周3次的用药方法，在体内干扰素水平呈现出典型的“峰-谷曲线”。干扰素血清水平大幅度波动容易使病毒水平反跳，产生耐药性，降低治疗效果。同时，短效干扰素存在毒副反应大，人长期使用耐受性差，免疫原性强等不足。因此，对短效干扰素进行修饰，延长其在体内的半衰期，维持体内血药浓度的稳定，将有助于提高其治疗病毒性肝炎的有效性，并减轻毒副作用。

为提高天然干扰素的活性，美国Amgen公司首次合成了一种非天然的干扰素（Consensus interferon,集成干扰素，商品名为干复津）。干复津是一种经计算机优化组合的非天然的重组α-干扰素，其序列由20种天然α-干扰素亚型序列优化组合而成，其抗病毒活性比天然干扰素提高了5～10倍。1997年，FDA批准干复津应用于丙型肝炎的治疗，研究结果显示疗效明显优于普通干扰素。美国专利US4695623、US4897471、US5372808公开了复合干扰素具有广谱的干扰素活性，有较强的抗病毒和抗肿瘤以及激活NK细胞的活性。但是干复津和天然α干扰素相同，具有稳定性差、体内半衰期短、免疫原性强等缺点。同时N端第一位的半胱氨酸需与99位半胱氨酸形成二硫键，不能有效的进行N末端修饰。虽然Amgen公司的美国专利US005985265 A公开了和干复津蛋白的N端修饰的方法，但无论在修饰率和修饰后保留的生物活性均明显低于其它蛋白的N末端修饰（重组人粒细胞集落刺激因子G-CSF和重组人生长激素GH等）。

在干复津基础上，根据同源序列最高原则，发明人设计了全新的集成干扰素序列，命名为集成干扰素变异体（super antiviral interferon,简称IFN-SA），现根据干扰素的命名原则改为重组集成干扰素变异体（或称重组复合干扰素变异蛋白）。由171氨基酸组成，在N末端专门设计引入Gly Ser Gly Gly Gly五个氨基酸序列，可实现N末端的专一位点PEG修饰。该结构与干复津结构不同，同时体外抗病毒活性提高了50%。本新型结构及其重组制备和在抗病毒性疾病中的应用，已获中国发明专利授权，专利号：ZL01102915.3。

然而，与其它蛋白质一样，使用集成干扰素变异体作为药物通常也会受到一些缺点的限制，包括免疫原性和半衰期短，其免疫原性导致中和抗体的形成以及临床治疗效果的损失，半衰期短则意味着需要对患者频繁给药以维持蛋白的有效治疗浓度。

聚乙二醇(polyetnylene glycol， PEG)是一种安全无毒、无活性的聚合物，常用于蛋白质药物修饰。修饰后的蛋白抗酶解、水溶性增加、半衰期延长、免疫原性和毒性降低（Inada,et al.,J.Bioact .And Compatible Polymers,5:343(1990). Delgalo,et al.,Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier systems,  9:249 (1992)    katre,Advanced Drug Delivery Systems,10:91(1993)）。