[发明专利]一种低糖化突变体干扰素-λ1、其表达、纯化方法及其应用

权利要求书

1.一种低糖化突变体干扰素-λ1，是将IFN-λ1成熟肽序列中Asn-Xaa-Ser(46NWS48)位的Asn置换为Gln(谷氨酰胺)后得到的蛋白质，其氨基酸残基序列具有序列表中SEQ ID No.1所示序列。

2.编码权利要求1所述低糖化突变体干扰素-λ1的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列具有序列表中SEQ ID No.2所示序列。

4.一种低糖化突变体干扰素-λ1的专用表达载体，是含有低糖化突变体干扰素-λ1基因表达单元的嗜甲醇酵母表达载体；所述低糖化突变体干扰素-λ1基因表达单元自上游至下游包括醇氧化酶(AOX)的启动子、α因子的前导肽(α-factor，α-F)编码序列、编码181个氨基酸残基的成熟肽低糖化突变体干扰素-λ1的基因序列以及醇氧化酶(AOX)的终止子。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于：所述低糖化突变体干扰素-λ1基因表达单元在载体中的拷贝数为6；用于构建所述含有低糖化突变体干扰素-λ1基因表达单元的嗜甲醇酵母表达载体为任意一种适于外源基因表达的嗜甲醇酵母表达载体，如pAO815；以pAO815为出发载体，构建的含有6个拷贝的低糖化突变体干扰素-λ1基因表达单元的嗜甲醇酵母表达载体为pA-6IFNλ1-Nm。

6.一种表达低糖化突变体干扰素-λ1的专用工程菌，是将权利要求4或5所述的低糖化突变体干扰素-λ1的专用表达载体导入嗜甲醇酵母中得到的。

7.根据权利要求6所述的工程菌，其特征在于：所述嗜甲醇酵母为任意适于蛋白表达的嗜甲醇酵母菌株，如嗜甲醇酵母菌株GS115；以嗜甲醇酵母菌株GS115为出发菌株，构建的转化有pA-6IFNλ1-Nm的重组嗜甲醇酵母菌株为GS115/pA-6IFNλ1-Nm。

8.一种低糖化突变体干扰素-λ1的表达和纯化方法，是发酵权利要求6或7所述的低糖化突变体干扰素-λ1的专用表达工程菌，经诱导表达后，对发酵液进行纯化，得到均一化的低糖化突变体干扰素-λ1；所述发酵重组嗜甲醇酵母时加入诱导剂甲醇的浓度为0.5％(体积百分比浓度)；对表达产物进行纯化的方法为强阳离子交换层析和凝胶过滤层析的两步柱层析法。

9.根据权利要求8所述的表达和纯化方法，其特征在于：所述纯化方法具体为：纯化的第一步为阳离子交换层析，缓冲液A为50mM PBS(pH 7.0)，缓冲液B为50mM PBS、1M NaCl、pH7.0；层析柱为SP Sepharose Fast Flow，将诱导表达的培养上清加入5倍体积的缓冲液A稀释后上样于经缓冲液A平衡的阳离子交换层析柱上，洗脱采用从缓冲液A到B的线性梯度洗脱，收集洗脱峰；纯化的第二步是将阳离子交换层析后的洗脱峰浓缩并进行凝胶过滤层析，缓冲液为50mM PBS、150mM NaCl、pH7.0，层析柱为Superdex 75，Hiload 16/60预装柱。

10.权利要求1所述的低糖化突变体干扰素-λ1在制备抗肿瘤细胞增殖药物中的应用。