[发明专利]一株2-酮基-D-葡萄糖酸高产菌株的筛选方法及该菌株的发酵方法

权利要求书

1.一种2-酮基-D-葡萄糖酸高产菌沙雷氏菌的筛选方法，其特征为：

1)沙雷氏菌的初步分离纯化

称取约0.2g土壤于20ml 0.85％无菌生理盐水中，振荡混匀之后将菌悬液涂布至5％盐浓 度的牛肉膏蛋白胨培养基上30℃培养36h，将产紫红色素的菌落作为进一步筛选的疑似菌株， 编号保存；

2)产2-酮基-D-葡萄糖酸沙雷氏菌的筛选

将上述分离纯化得到的菌种接种于5％葡萄糖的牛肉膏蛋白胨培养基中，培养36h后离心 收集发酵液，发酵液采用内标法经高效液相色谱进行定性分析，使得2-酮基-D-葡萄糖酸钙 标准品峰高增高的菌株即为产2-酮基-D-葡萄糖酸的沙雷氏菌。

2.根据权利要求1所述一种产2-酮基-D-葡萄糖酸沙雷氏菌的筛选方法，其筛选得到产 2-酮基-D-葡萄糖酸沙雷氏菌经形态学、生理生化及16S rDNA分子生物学鉴定为沙雷氏菌， 并命名为Serratia sp.FMME043。

3.一种2-酮基-D-葡萄糖酸的生产方法，其特征是采用Serratia sp.FMME043为出发菌株， 以种子培养和液体发酵生产2-酮基-D-葡萄糖酸钙；

1)种子培养：牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 5g/L初始PH6.8-7.2；

培养条件：温度30℃、摇床转速200r/min条件下，培养11-12h；

2)液体发酵培养：葡萄糖140-200g/L，(NH₄)₂SO₄ 1.93g/L，Na₂SO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.8g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，MnCl₂·4H₂O 0.036g/L，FeSO₄·7H₂O 0.036g/L，初始 PH6.8-7.2；

发酵条件：接种量10％，温度30℃、摇床转速200r/min条件下，发酵24-36h。