[发明专利]一种检测埃博拉病毒的荧光定量PCR检测方法及其引物和试剂盒

权利要求书

1.一种检测埃博拉病毒的遗传标记分子，其特征在于，所述的遗传标记分子是埃博拉病毒NP基因的第857位至第1130位所示序列的核苷酸中连续的50-273个核苷酸，或者是埃博拉病毒NP基因的第878位至第1074位所示序列的核苷酸中连续的50-196个核苷酸，所述的位置是指在埃博拉病毒株Zaire Ebola virus strain Mayinga的NCBI登录号AF499101.1所示NP基因上位置。所有的埃博拉病毒NP基因等位基因在上述位置范围内的核苷酸片段都是本发明保护的检测埃博拉病毒的遗传标记。

2.如权利要求1所述的的遗传标记分子，其特征在于，所述的遗传标记分子是博拉病毒NP基因的第857位至第1130位所示序列的核苷酸，或者是埃博拉病毒NP基因的第878位至第1074位所示序列的核苷酸，所述的位置是指在埃博拉病毒株Zaire Ebola virus strain Mayinga的NCBI登录号AF499101.1所示NP基因上位置。

3.一种检测埃博拉病毒的遗传标记分子的引物对，其特征在于，所述的引物长度25-38个核苷酸，且一个与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：4、或SEQ ID NO：5所示序列相同，另一个相应的与SEQID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、或SEQ ID NO：5所示序列互补，并且扩增产物的长度为50-300bp。

4.一种检测埃博拉病毒的引物对，其特征在于，该引物对中，引物长度15-30bp，其中一个引物含有一到两个简并碱基，该简并碱基分别和Z、S、B、C、R五种亚型EBOV的特异性遗传标志序列的差异位点相同，该引物中该简并碱基以外的序列与Z、S、B、C、R五种亚型EBOV的特异性遗传标志序列相同或有个别不同，但是不影响PCR扩增反应；另一个引物也含有一到两个简并碱基，该简并碱基分别和Z、S、B、C、R五种亚型EBOV的特异性遗传标志序列的差异位点互补，该引物中该简并碱基以外的序列与Z、S、B、C、R五种亚型EBOV的特异性遗传标志序列互补或有个别不互补，但是不影响PCR扩增反应，该引物对的扩增片段为70-300bp。

5.如权利要求4所述的引物对，其特征在于，所述的引物对中，一条是SEQ ID NO：16所示序列的核苷酸，另一条是SEQ ID NO：17所示序列的核苷酸。

6.一种检测埃博拉病毒的PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如权利要求4或5所述的引物。

7.如权利要求6所述的PCR试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括：阳性对照品、阴性对照品、RNA提取试剂、反转录试剂、和SYBR GreenI荧光定量反应液。

8.一种检测埃博拉病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待检样品的RNA；

2)将上述提取的RNA反转录成cDNA；

3)将上述cDNA加入荧光定量反应液中用实时荧光PCR仪进行扩增检测；

4)通过比较待检样品和标准品的循环阈值而对待检样品的其实拷贝数进行定量。

9.一种埃博拉病毒NP基因的用途，其特征在于，用于制备埃博拉病毒的遗传标记分子。

10.如权利要求1或2所述的检测埃博拉病毒的遗传标记分子作为埃博拉病毒的特征序列在常规非生物安全P4级实验室中检测埃博拉病毒的应用。