[发明专利]一株γ-变形菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株γ-变形菌及其应用，特别是一株产碱性淀粉酶的γ-变形菌及其应用。 

背景技术

α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)是一种降解淀粉的重要的工业用酶，主要应用在食品、纺织、医药、洗涤剂等领域。碱性淀粉酶最适反应pH应高于8.0，碱性淀粉酶可用于纺织品退浆、洗涤剂添加剂以及以淀粉作粘结剂的粘度调节剂等。Horikoshi(Horikoshi K.Production of alkaline enzymes by alkalophilic mlcroorganusms.Agricultural and Biological Chemistry，1971，35(11)：1783-1791)在1971年首先报道了产自嗜碱菌A-40-2的碱性淀粉酶。2007年Saxena(Saxena R，Voight BF，Lyssenko V，Burtt NP， de Bakker PIW，Chen H，Roix JJ，Kathiresan S.fiirschhorn JN，Daly MJ.Genome-wide association analysis identifies loci for type 2 diabetes and triglyceride levels.Science，2007，316(5829)：1331-1336)等人筛选到一株可以产碱性淀粉酶的菌株。2010年Pancha(Pancha I，Jain D，Shrivastav A，Mishra S，Shethia B，Mishra S，VP M，Jha B. A thermoactive[alpha]-amylase from a Bacillus sp.isolated from CSMCRI salt farm. International Journal of Biological Macromolecules，2010，47(2)：288-291)等人筛选出一株产耐温淀粉酶菌株。四川大学卢涛等人(卢涛等.高温α-淀粉酶生产菌株的选育[J].四川大学学报(自然科学版)，2002，39(6)：1131-1133)从西藏当雄八宿温泉土壤中筛选出一株分泌高温淀粉酶的高产突变菌株，为地衣芽孢杆菌，该菌生长的地理环境独特，其高温特性良好，经改造得到了一种pH活性域较宽、热稳定性较高的淀粉酶。目前，国内的前处理酶制剂市场基本被丹麦诺维信公司和美国杰能科公司所垄断。诺维信公司介绍了一种碱性淀粉酶，有较宽的pH及温度范围。目前国内外工业化的碱性淀粉酶几乎没有，因此筛选产碱性淀粉酶的优良菌株非常有必要。 

发明内容

本发明提供了一株γ-变形菌(gamma Proteobacterium)JN25，已于2011年7月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2011230；以其16SrDNA全序列为基础的系统发育树如说明书附图1所示。 

本发明提供了一种碱性淀粉酶，该酶为CCTCC NO：M 2011230生产，最适反应pH为8.0-10.5，尤其是10.0。 

所述产碱性淀粉酶的γ-变形菌是从碱性土壤中筛选，其保藏条件如下：从生长良好的固态平板培养基上接取3环γ-变形菌到摇瓶培养基中，30℃摇床(200rpm)培养36h，取0.65 mL移入含有0.3 mL无菌甘油的甘油管中，放入-70℃超低温冰箱保存。 

所述固态平板培养基为(w/v)：1.0％玉米淀粉，0.5％酵母粉，1.5％蛋白胨，0.5％NaCl，0.05％KH₂PO₄，2％琼脂粉，灭菌后，用Na₂CO₃调pH 9.5-10.5。 

所述液体发酵培养基为(w/v)：1.5％可溶性淀粉，1.0％酵母粉，1.0％蛋白胨，0.5％NaCl，0.05％KH₂PO₄，灭菌后，用Na₂CO₃调pH 9.5-10.5。 

所述γ-变形菌的培养条件为：将已保藏甘油管的γ-变形菌接入液体发酵培养基，30℃，200rpm，摇床培养36h。 

将产碱性淀粉酶的γ-变形菌发酵后的发酵液，10000rpm离心10min，在pH 10.0条件下，采用DNS法测定离心后发酵上清液的碱性淀粉酶酶的酶活。在碱性条件下，酶活明显。在不同碱性pH值下，测定碱性淀粉酶的最适反应pH，碱性淀粉酶的最适反应pH为10.0，在碱性环境下，可以高效降解淀粉。