[发明专利]截短侧耳素产生菌的微量培养方法和其高产菌的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种截短侧耳素产生菌的微量培养方法，其特征在于：所述微量培养方法的步骤如下：

1）、将截短侧耳素产生菌稀释成菌悬液，涂布于平板，培养后分离单菌落；

2）、配制固体发酵培养基：以下为质量百分含量：葡萄糖5.7%、玉米浆4%、大豆油0.4%、MgSO₄0.04%、大豆蛋白胨1%、琼脂粉1.5%，其余为水；

3）、将步骤2）中的固体发酵培养基高压灭菌后在无菌环境中将其加入酶标板，每孔加入量为孔体积的1/3-2/3； 

4）、将步骤1）中形成的截短侧耳素产生菌的单菌落菌丝体接种于步骤3）中制备的酶标板中，于25℃培养7-9天，完成截短侧耳素产生菌的微量培养。

2.根据权利要求1所述的微量培养方法，其特征在于：步骤3）中所述固体发酵培养基的每孔加入量为孔体积的1/2。

3.一种截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：所述高通量筛选方法的步骤如下：

1） 将截短侧耳素产生菌稀释成菌悬液，涂布于平板，培养后分离单菌落；

2）、配制固体发酵培养基：以下为质量百分含量：葡萄糖5.7%、玉米浆4%、大豆油0.4%、MgSO₄0.04%、大豆蛋白胨1%、琼脂粉1.5%，其余为水；

3）、将步骤2）中的固体发酵培养基高压灭菌后在无菌环境中将其加入酶标板，每孔加入量为孔体积的1/3-2/3；

4）、将步骤1）中形成的截短侧耳素产生菌的单菌落菌丝体接种于步骤3）中制备的酶标板中，于25℃培养7-9天；

5）、在步骤4）的每孔中加入50-100μl甲醇或乙醇提取；

6）、每孔吸取一定量提取液，转板于另一酶标板中；

7）、向每孔加入浓硫酸显色，所述浓硫酸的体积大于等于提取液的体积；

8）、将每孔稀释相同倍数，吸取稀释液转板于另一酶标板中，在450nm-460nm波长处进行酶标仪的紫外吸收测定，分析测定结果，得到筛选后的截短侧耳素高产菌。

4.根据权利要求3所述的截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：步骤3）中所述固体发酵培养基的每孔加入量为孔体积的1/2。

5.根据权利要求3所述的截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：步骤7）中所述浓硫酸的体积与提取液的体积相同。

6.根据权利要求3所述的截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：步骤8）中的稀释倍数为10-100倍。

7.根据权利要求3所述的截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：步骤8）中在455nm波长处进行酶标仪的紫外吸收测定。

8.根据权利要求3所述的截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：步骤5）中提取时间为5-20分钟。

9.根据权利要求8所述的截短侧耳素高产菌的高通量筛选方法，其特征在于：步骤5）中提取时间为10分钟。