[发明专利]一种猪TLR4基因单核苷酸多态性的检测方法

权利要求书

1.一种猪TLR4基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于如下步骤：

步骤一，据GenBank数据库猪TLR4基因序列设计特异引物：

正义引物5′-CAATCAGTTGGTTTTGGGAGA-3′

反义引物5′-CACTTCTAAGTGTTGCCACCTG-3′

应用上述引物对待检测猪模板cDNA进行PCR扩增；

步骤二，对特异性扩增产物进行分离、纯化，获得特异核酸；

步骤三，对分离纯化的扩增产物进行序列测定、比对分析，得出待检猪TLR4基因是否存在G960A或G962A单核苷酸碱基突变。

2.根据权利要求1所述一种猪TLR4基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于：

PCR扩增反应体系12μl：10×PCR buffer 1.2μl，2mM/L dNTPs 1.2μl，25mM/L MgCl₂0.8μl，10pmol/μl primer 1.0μl，5U/μl Taq polymerase 0.2μl，50ng/μl DNA 0.8μl，ddH₂O 6.8μl；

反应条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，34个循环；72℃延伸8min；

其中，PCR扩增片段长度为247bp。