[发明专利]RNAi转基因植物的快速精确检测方法及其应用

权利要求书

1.RNAi转基因植物的快速精确检测方法，步骤如下：

(1).提取待检测植物的基因组DNA，

(2).进行PCR扩增，

(3).取部分PCR扩增产物进行变性/复性处理，

(4).以原PCR扩增产物为对照，对进行变性/复性处理后的PCR扩增产物进行凝胶电泳，观察变性-复性处理后PCR扩增产物的电泳迁移距离的是否比原PCR扩增产物的电泳迁移距离更远；

所述PCR扩增中的采用的引物，其正向引物为：

CaMV 35S启动子AGAACTCGCCGTAAAGACT，

Napin启动子TAGAGTTGGGTTGAATGAGAT，

和Ubi启动子TGCTCACCCTGTTGTTTG；

其反向引物为：

nosT  终止子AAATGTATAATTGCGGGACT，

ocsT  终止子CCGTAACTTTCGGTAGAGC，

和CaMV 3′UTR终止子CCAGATAAGGGAATTAGGGT。

2.根据权利要求1所述的快速精确检测方法，所述PCR扩增的体系为：10×Buffer 2.5μL，dNTPs 200μM，Glycerol 5％，Primer F/R 0.2μM each，Template DNA 100ng，Taq DNApolymerase 1.25U，加ddH₂O至25μL。

3.根据权利要求2所述的快速精确检测方法，所述PCR扩增程序为：预变性94℃5min，变性94℃30s，退火59℃30s，延伸72℃30s，扩增36个循环，72℃延伸10mins。

4.根据权利要求1～3任一所述的快速精确检测方法，所述变性-复性处理：变性94℃ 5mins；缓慢复性94℃～24℃，每降低5℃保持1min，室温放置15mins。

5.权利要求1～4所述任一方法在检测RNAi转基因植物中的应用。