[发明专利]一种云杉苷的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，公开了一种云杉苷的制备方法。

背景技术

云杉苷，英文名：Picein；分子式：C₁₄H₁₈O₇；分子量：298.29；化学性质：水中析出者为针状结晶的一水合物。甲醇中析出者为无水物。味苦。15℃时1g产品溶于50ml冷水、1ml沸水、约650ml冷无水乙醇、约40ml沸无水乙醇和140ml乙酸乙酯，溶于热的冰乙酸，几乎不溶于乙醚和氯仿。在稀矿酸及氢氧化碱中均被水解成D-葡萄糖及对羟基苯乙酮。熔点195～196℃（无水品）。

兔儿风属植物为多年生草本，民间药用全草，资源丰富，并有悠久的民间药用历史。具有清热、利湿、凉血、解毒的功效，广泛用于治疗感冒咳喘、风湿疼痛、跌打损伤、活血止血、肠炎痢疾、咽喉炎及泌尿系统疾病等症。《上海市药材标准》、《江西中药材标准》、《云南省药品标准》均有收载。兔儿风是我国特有的植物，但目前尚无对其化学成分的系统研究。因此，从基础研究和应用研究的角度来看，都有必要对兔儿风的有效成分进行深入研究，为中药质量控制和中药药理研究提供科学依据。同时，经研究发现该植物中存在结构新颖独特和有活性的先导化合物，具有抗肿瘤和抗炎活性。其中，云杉苷具有对CCl₄和GalN引起的大鼠肝细胞中毒有弱的抗肝毒活性。

目前云杉苷的制备方法较少，文献“中甸兔儿风的活性成分研究”，该文献公开的方法是醇提，正丁醇萃取，反覆硅胶柱层析得到云杉苷，该法正丁醇萃取率较低，保留成分损失较大。尚未有报道用半制备色谱对云杉苷进行分离纯化的报道。本发明采用常规大孔树脂柱分离和高效液相色谱相结合的方法制备云杉苷。该方法操作简单，产品纯度高，可达98%以上。

发明内容

本发明采用常规大孔树脂柱分离和高效液相色谱相结合的方法制备云杉苷。该方法操作简单，产品纯度高，可达98%以上。

本发明的目的是提供一种云杉苷的制备方法，具体步骤如下：

（1）提取：将兔儿风属药材粉碎，经乙醇水提取后，趁热过滤、合并提取液，减压浓缩得浓缩液；

（2）萃取：将浓缩液用石油醚萃取，弃去萃取液；

（3）柱层析：将水层上大孔树脂柱吸附，丙酮-甲醇-水洗脱，分步收集，每份约500ml，合并云杉苷流分，低温浓缩至干；

（4）纯化：将干燥物用流动相溶解，采用半制备型液相色谱纯化，收集保留流分，减压浓缩、干燥，最后采用冰乙酸热回流结晶得产品。

步骤（1）中所述乙醇浓度体积百分比为45-65%，提取两次，液料比为3-10:1（V/W）。

步骤（3）中所述大孔树脂为HPD300、HPD450、NKA-9、AB-8型大孔树脂，所述洗脱条件为先用水洗至颜色变浅，然后改用丙酮-甲醇-水（15:25:10）洗脱。

步骤（4）中所述半制备型高效液相色谱条件为：ODS C18柱；流动相组成体积比：甲醇-水（38-65:35-62），流速5.0-20ml/min，柱温：室温；检测波长：UV307nm。

本发明的优点在于：1）操作耗时短，易于产业化放大；2）提取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂用量少，并可回收再利用；3）具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为云杉苷的进一步开发提供药理原料和实践支持。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

取3kg兔儿风属药材经粉碎后按照料液比3:1（V/W）用体积百分比浓度为65%的乙醇回流提取两次，提取液减压浓缩，用石油醚萃取，弃去萃取液，水层上HPD300型大孔树脂柱吸附，先用水洗至颜色变浅，再改用丙酮-甲醇-水（15:25:10）洗脱，分步收集，每份约500ml，合并云杉苷流分，5℃低温浓缩至干，将干燥物溶于流动相中，超声溶解，用半制备型高效液相色谱仪进行精制，色谱条件为：色谱柱，ODS C18柱；流动相组成体积比，甲醇-水（38:62），流速5.0ml/min；柱温：室温；检测波长，UV307nm，进样量：50μl，柱温：室温，按照色谱峰进行切割收集合并，减压浓缩、干燥，最后采用冰乙酸热回流结晶得云杉苷无色结晶0.12g，含量98.6%。

实施例2：