[发明专利]青虾AST基因和用于扩增青虾AST基因的引物组、及其扩增方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因克隆领域，特别涉及青虾AST基因、其扩增方法及扩增引物组。 

  

背景技术

青虾，学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense)，隶属十足目（Decapoda），长臂虾科（Palaemonidae）、沼虾属（Macrobrachium），广泛分布于全国各地，是我国重要的淡水养殖虾类。近年来，累代养殖引发的种质资源退化、规格小、性早熟等现象成为制约青虾养殖业可持续发展的关键问题。解决这些生产问题的关键在于对青虾的生长发育、繁殖、蜕皮等调控机理的掌握。 

咽侧体抑制激素(Allatostatin，AST)是一类由几至几十个氨基酸构成的神经肽，由脑神经细胞分泌的AST多肽前体水解而来。AST多肽首先在昆虫体内被发现，通过神经或体液途径到达咽侧体(Corpora allata,CA)，抑制咽侧体的活性，调节咽侧体对保幼激素(Juvenile hormone,JH)的合成与释放，是参与昆虫蜕皮和生长发育过程的一类重要激素。神经生理学研究表明AST多肽作为神经递质大量存在于甲壳动物的中枢神经系统和口胃神经系统，抑制幽门的运动方式以及肠道收缩的频率。甲壳动物和昆虫虽同属于节肢动物门(Arthropoda)，但在进化上却不相同。甲壳动物不具有昆虫的咽侧体，但具有咽侧体同源器官下颌器官(Mandibular organs，MO)，该器官合成并分泌保幼激素类似物甲基法尼酯(MF，甲壳动物中的一种性腺刺激激素，促进蜕皮和性腺及卵的成熟)，AST多肽刺激下颌器官MF的生成，因此在甲壳动物中具有促进蜕皮和生殖的重要功能。 

    目前已在斑节对虾(Penaeus monodon)、利莫斯螯虾(Orcanectes limosus)和三叶真蟹(Carcinus maenas)中都分离提取到多种AST多肽。然而目前有关甲壳动物AST基因的研究却很少有相关报道，因此在甲壳动物中开展AST基因的研究对于甲壳动物生长发育机制的研究具有十分重要的意义。 

发明内容

有鉴于此，本发明提供青虾AST基因、其扩增方法及扩增引物组。利用本发明提供的引物组从青虾脑组织中克隆到了AST基因序列，为青虾蜕皮和生殖调控机制的研究提供参考，为青虾良种繁育积累背景资料。 

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案： 

本发明提供了青虾AST基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了用于扩增青虾AST基因的引物组，其由如下引物组成： 

引物组1：

正向引物ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

正向引物ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

正向引物ASF3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

正向引物ASF4的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

反向引物ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；

反向引物ASR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；

反向引物ASR3的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；

反向引物ASR4的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；

引物组2：

正向外引物3ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；

正向内引物3ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；

反向外引物5ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；

反向内引物5ASR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。

本发明还提供了一种扩增青虾AST基因的方法，包括如下步骤： 

步骤1：获得青虾脑组织总RNA；

步骤2：合成cDNA；

步骤3：用引物组1扩增获得青虾AST基因265～2681bp片段；所述引物组1由如下引物组成：

正向引物ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

正向引物ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

正向引物ASF3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

正向引物ASF4的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

反向引物ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；