[发明专利]青虾AST基因和用于扩增青虾AST基因的引物组、及其扩增方法无效
| 申请号： | 201110303793.0 | 申请日： | 2012-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN102433344A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 傅洪拓;卜宪飞;乔慧;吴滟;龚永生 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/16 | 分类号： | C12N15/16;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 214081*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 青虾 ast 基因 用于 扩增 引物 及其 方法 | ||
1.青虾AST基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.用于扩增青虾AST基因的引物组，其特征在于，其由如下引物组成：
引物组1：
正向引物ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
正向引物ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
正向引物ASF3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
正向引物ASF4的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
反向引物ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
反向引物ASR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
反向引物ASR3的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
反向引物ASR4的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；
引物组2：
正向外引物3ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
正向内引物3ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；
反向外引物5ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；
反向内引物5ASR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。
3.一种扩增青虾AST基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：获得青虾脑组织总RNA；
步骤2：合成cDNA；
步骤3：用引物组1扩增获得青虾AST基因265～2681bp片段；所述引物组1由如下引物组成：
正向引物ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
正向引物ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
正向引物ASF3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
正向引物ASF4的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
反向引物ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
反向引物ASR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
反向引物ASR3的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
反向引物ASR4的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；
步骤4：用引物组2扩增获得青虾AST基因265～2681bp片段的3’端和5’端片段；所述引物组2由如下引物组成：
正向外引物3ASF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
正向内引物3ASF2的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；
反向外引物5ASR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；
反向内引物5ASR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。
4.步骤5：将所述AST基因cDNA序列的265～2681bp片段、所述AST基因265～2681bp片段的3’端和5’端片段拼接，即得。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤4所述扩增为套式两轮PCR。
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