[发明专利]用于免疫抗分枝杆菌的组合物

说明书

本发明涉及一种用于产生宿主T细胞免疫反应的方法。该方法包括施用载体疫苗的步骤，所述载体疫苗包含非复制或复制受损的病毒载体，所述病毒载体表达分枝杆菌抗原85A基因(在本文还称为“Ag85A”基因)的翻译产物。

本文引用的所有公布、专利和专利申请通过引用全部结合入本文。

发明背景

结核病是由呼吸病原体结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)引起的，每年导致2百万人死亡，主要在发展中世界(http://www.who.int/gtb/publications/globrep01/index.html)。唯一得到许可的抗结核分枝杆菌的疫苗，即卡介苗(BCG)(Calmette，A.，C.Guerin.(1924)Ann.Inst.Pasteur.38：371)，是牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)的减毒株，其在发展中国家通常作为单次剂量皮内施用于新生儿。许多研究的综述表明，BCG免疫保护性抵抗儿童脑膜结核和系统形式的疾病。然而，针对全球主要的结核病死亡原因——成人肺部疾病的保护效力是可变的(范围为0-80％)(Colditz，G.A.等，(1994).JAMA 271：698)，并随时间而减弱(Sterne，J.A.等，(1998)Int.J.Tuberc.Lung Dis.2：200)。变化的基础是不确定的。即使如此，每年全球有80％的婴儿接受BCG(http://www.who.int/inf-fs/en/fact 104.html)。

结核分枝杆菌是一种细胞内病原体，对抗其的保护效力与以下因素有关：保持强烈的细胞介导的对感染的反应，所述反应涉及CD4+和CD8+T细胞；和与Th1-型细胞因子(特别是IFN-γ)反应的能力(Flynn，J.L.，J.Chan.(2001)Annu.Rev.Immunol.19：93)。BCG免疫诱导分泌IFN-γ的T细胞，主要是CD4+T细胞表型，其与结核分枝杆菌蛋白交叉反应(Launois P等，(1994)Infection and Immunity 62(9)：3679-87)。近期研究表明，胃肠外给药的BCG未能诱导可能是保护性抵抗肺部疾病的关键的肺粘膜T细胞免疫反应。

因此，需要开发其他的抵抗分枝杆菌疾病的疫苗。

发明内容

令人惊讶的是，目前已经发现：表达分枝杆菌抗原85A(Ag85A)的病毒载体在作为免疫原性组合物施用时，可以诱导人类患者的T细胞免疫反应。因此，本发明提供了一种在人类患者中诱导针对分枝杆菌抗原的T细胞免疫反应的方法，该方法包括为患者施用免疫原性组合物的步骤，所述组合物包含表达分枝杆菌Ag85A基因翻译产物的非复制或复制受损的病毒载体。优选地，所述免疫原性组合物是载体疫苗。该新型疫苗方法显著提高了所述T细胞免疫反应的强度和持续时间。优选地，所述T细胞反应是记忆T细胞反应。

85A抗原(Ag85A)(登记号CAA17868和BX842584)是Ag 85复合体的成员。Ag 85复合体是由结核分枝杆菌、BCG和许多其他种类的分枝杆菌分泌的蛋白质家族，包括Ag85A、Ag85B和Ag85C(Harth，G.等，(1996)Infect.Immun.64：3038-3047)。抗原85A(Ag85A)在所有分枝杆菌种类之中是高度保守的，并且在动物和人类研究中是免疫显性的。Ag 85A(Ag85A)由fbpA基因编码。来自结核分枝杆菌的85A抗原(Ag85A)在本文列于SEQID NO 1和SEQ ID NO 2)。

在结核疫苗研究中，诱导加强的T细胞反应的近期策略已经利用了使用质粒、细菌或病毒载体的重组DNA技术和重组蛋白质来表达结核分枝杆菌抗原。已经显示，在结核分枝杆菌攻击后，使用表达Ag85A的MVA载体加强的Ag85A DNA对小鼠的免疫提供了相当于BCG的保护程度(McShane，H.等，(2002).Infect.Immun.70：1623-1626)。然而，单独使用重组MVA载体单次或反复免疫所产生的免疫反应是弱的。

对于针对分枝杆菌疾病(例如结核病)的长期保护，认为重要的是保持可持续刺激保护性免疫数十年的“记忆T细胞”。

记忆免疫反应经典地归因于长寿的抗原特异性T淋巴细胞的再活化，所述T淋巴细胞直接产生于分化的效应T细胞，并保持一致的休眠状态。认为效应T细胞和记忆T细胞分布至机体的所有组织，特别是病原体可能再次相遇的上皮表面(例如，皮肤和消化道)。