[发明专利]DNA重组酶Cre基因的改造、重组蛋白表达方法及应用

权利要求书

1.一种DNA重组酶活力减弱的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白是对DNA酶重组酶Cre的氨基酸序列进行改造，将其173位点的精氨酸改造成组氨酸。

2.根据权利要求1所述的DNA重组酶活力减弱的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白173位点组氨酸的核苷酸序列为CGT。

3.根据权利要求2所述的DNA重组酶活力减弱的重组蛋白的表达方法，其特征在于按如下步骤进行：

ⅰ.根据Cre重组酶173位点的核苷酸序列合成两条单链寡核苷酸作为PCR用引物，以pRIP-Cre为模板；

ⅱ.将PCR产物自连，转染感受态菌株TOP10，扩增并提取质粒，获得点突变的pRIP-Cre（R173H）；

ⅲ.经测序鉴定后转染胰岛beta细胞NIT-1。

4.根据权利要求3所述的DNA重组酶活力减弱的重组蛋白的表达方法，其特征在于：所述点突变PCR引物核苷酸序列为：

前引物 5′-AACACCCTGTTACATATAGCCGAAATT-3′，

后引物 5′-ATAAGCAATCCCCAGAAATGCCA-3′。

5.权利要求3所述的DNA重组酶活力减弱的重组蛋白在胰岛beta细胞标记中的应用。