[发明专利]一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤抗原的筛选技术领域，涉及一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法。

背景技术

恶性肿瘤是当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一，因此，世界卫生组织和各国政府卫生部门都把攻克癌症列为一项首要任务。在第18届国际抗癌症联盟大会上，世界卫生组织发表的一项研究报告表明，全球癌症状况将日益严重，今后20年新患者人数将由目前的每年1000万增加到1500万，因癌症而死亡的人数也将由每年600万增至1000万。为应对上述严峻形势，报告呼吁各国制订反癌症的全国计划和具体实施方案，并特别强调对癌症预防、早期检查和早期治疗的重要意义。

尽管两个世纪以前就有人提出用肿瘤疫苗来治疗人类肿瘤的想法，但因长期以来无法在肿瘤细胞上找到肿瘤特异性抗原而进展缓慢。从20世纪80年代开始，各种不同肿瘤抗原的鉴定方法相继建立，发现和鉴定了一系列肿瘤抗原，从而为肿瘤主动免疫治疗和靶向治疗的发展奠定了基础。然而，肿瘤细胞的多种免疫逃逸机制，使得针对所发现的大部分肿瘤抗原作为靶点的免疫治疗效果不尽如人意。

作为免疫治疗理想的肿瘤抗原应具备：在肿瘤细胞特异、稳定表达，正常组织不表达，并且对维持肿瘤细胞的存活至关重要。近年来，随着肿瘤免疫学的快速发展，只局限性表达于肿瘤及睾丸组织中的肿瘤/睾丸抗原的发现，无疑为肿瘤的免疫治疗带来了新的希望。由于肿瘤/睾丸抗原具有诱导机体产生特异性细胞免疫应答或特异性体液免疫应答的特点，使得肿瘤/睾丸抗原较其它类型的肿瘤抗原在肿瘤免疫治疗中更具应用前景，已成为当今肿瘤研究的热点之一。

虽然目前已有许多肿瘤/睾丸抗原被陆续鉴定出来，但可以实际应用于肿瘤疫苗构建及治疗靶点的肿瘤/睾丸抗原仍十分有限。为了大规模快速发现更具应用价值的新肿瘤/睾丸抗原，由美国肿瘤研究院和路德维格癌症研究所牵头，联合8个国家的30个研究机构，成立了“发现人类肿瘤抗原合作项目”的国际合作联盟，足见筛选和鉴定新肿瘤/睾丸抗原的重要性和迫切性。

目前，以T细胞表位克隆技术(T cell epitope cloning)、多肽洗脱法(peptide elute method)、表位预测法(epitope prediction method)、cDNA表达文库血清学筛选分析技术(serological analysis of cDNA expression libraries，SEREX)等为主的免疫学方法，和以差异显示(different display，DD)、代表性差异分析(representational difference analysis，RDA)、cDNA芯片分析(cDNA microarray analysis)、基因表达连续性分析(serial analysis of gene expression，SAGE)、表达序列标签测序及大规模平行信号测序(massively parallel signature sequencing，MPSS)等为主的基因表达分析法，在筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原方面发挥了巨大的作用。

然而，无论是免疫学方法还是基因表达分析法均有一定的局限性。前者依赖于肿瘤患者体内针对肿瘤/睾丸抗原的特异性免疫应答，但多数情况下，肿瘤患者处于免疫抑制状态，所以利用这种方法筛选、鉴定并获得肿瘤/睾丸抗原的机率可能是较低的。鉴于部分蛋白的核酸表达水平与蛋白表达水平有差异，即核酸虽有表达，但并不表示蛋白就一定会表达。因此，肿瘤/睾丸抗原基因表达分析法并不能有效地鉴定差异表达的蛋白，例如备受研究者关注的MPSS法也仅仅鉴定了CT45一个肿瘤/睾丸抗原。显然，目前的肿瘤/睾丸抗原的鉴定方法无法满足肿瘤免疫学的研究。

因此，建立新的、强有力的特异性肿瘤/睾丸抗原筛选工具，不仅将为人们更加全面、系统地发现新的肿瘤抗原，丰富人们对肿瘤分子机制的认识，同时也将促进肿瘤免疫诊断、治疗的发展。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法，在人生精细胞作为免疫原筛选的特异性单克隆抗体的基础上，来筛选和鉴定未知肿瘤/睾丸抗原的新方法。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法，包括以下步骤：

1)以人生精细胞作为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，免疫组化法筛选识别人生精细胞的特异性单克隆抗体；