[发明专利]一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法无效
| 申请号： | 201110297248.5 | 申请日： | 2011-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN102507937A | 公开（公告）日： | 2012-06-20 |
| 发明（设计）人： | 杨琨;宋朝君;金伯泉 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N30/02 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 精细 特异性 单克隆抗体 筛选 鉴定 肿瘤 睾丸 抗原 方法 | ||
1.一种基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)以人生精细胞作为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，免疫组化法筛选识别人生精细胞的特异性单克隆抗体；
2)采用免疫组化染色方法，在蛋白水平上从识别人生精细胞的特异性单克隆抗体当中，筛选出只与人肿瘤组织反应，且与人正常组织不反应的特异性单克隆抗体作为候选识别肿瘤/睾丸抗原的抗体；
3)利用候选识别肿瘤/睾丸抗原的抗体与人阳性肿瘤细胞的裂解物进行抗原抗体反应，收集形成的免疫沉淀，再将候选识别肿瘤/睾丸抗原的抗体所捕获的肿瘤/睾丸抗原进行蛋白组学分析和鉴定。
2.如权利要求1所述的基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法，其特征在于，所述的在蛋白水平上的筛选为：采用免疫组化染色方法，筛选出只与人肿瘤组织石蜡切片反应，且与人正常组织石蜡切片不反应的特异性单克隆抗体作为候选识别肿瘤/睾丸抗原的抗体。
3.如权利要求1所述的基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法，其特征在于，所述的免疫沉淀所获得的肿瘤/睾丸抗原的收集为：候选识别肿瘤/睾丸抗原的抗体先与Sepharose 4B交联，再与人阳性肿瘤细胞的裂解物进行抗原抗体反应，形成沉淀之后，沉淀中加入洗脱液，混合后离心，收集上清液，用超滤浓缩管浓缩或用冷丙酮沉淀，然后进行SDS-PAGE，收集所捕获的肿瘤/睾丸抗原所对应的条带；
所述的洗脱液为0.1mol/L的甘氨酸-盐酸，pH2.7。
4.如权利要求1所述的基于生精细胞特异性单克隆抗体筛选和鉴定肿瘤/睾丸抗原的方法，其特征在于，所述的对免疫沉淀所获得的肿瘤/睾丸抗原进行蛋白组学分析为：将所捕获的肿瘤/睾丸抗原用蛋白酶降解成多肽，收集酶解后的多肽，对其进行质谱分析以确定蛋白序列。
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