[发明专利]一种肽醛的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属多肽化学领域，特别涉及一种肽醛的制备方法。

背景技术：

肽醛是指C端为醛基的多肽类似物，主要作为丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶以及金属蛋白酶等四类蛋白水解酶的抑制剂。对于丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶，肽醛通过与丝氨酸或半胱氨酸残基活性位点结合形成半缩醛或半硫缩醛，发挥蛋白酶抑制作用；对于天冬氨酸和金属蛋白酶，肽醛与其键合形成水合物来达到抑制作用。上述肽醛的蛋白酶抑制作用都是通过与蛋白酶活性位点形成稳定的类四面体结构，从而阻止了蛋白底物与酶的结合。

目前肽醛的制备方法主要分为液相法和固相法两类。

(1)液相法。主要有还原法和氧化法制得肽醛。此类方法主要参见以下文献：J.Med.Chem.1998，41，4301-4308；J.Med.Chem.，1998，41，2786-2805.等。液相法存在的主要问题是：中间产物分离麻烦，制备周期长。

(2)固相法。相对于液相法，固相法存在制备简便、周期短的优势，更符合快速制备肽醛的要求。固相法目前主要包括还原法、氧化法和水解法。此类方法主要参见以下文献：Tetrahedron Lett，1995，36，7871-7874；J.Com.Chem，2000，2，172-181；Tetrahedron.Lett，1997，38，7749-7742；Tetrahedron Lett，1997，38，7119-7122。当前固相法中存在的主要问题是：缺乏合适的连接臂将氨基醛固载化到固相载体上，反应条件较苛刻、易消旋，产率低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有肽醛的制备方法所存在的不足，而采用一种新的连接臂，提供一种简便、高效的肽醛制备方法，解决目前肽醛制备工艺繁琐、周期长、产率低的问题。

本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：

一种肽醛的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)制备保护的氨基醛步骤：

保护氨基酸与N，O-二甲基羟胺盐酸盐在二甲基甲酰胺中溶解，完全溶解后得溶解液A，向溶解液A中加入缩合试剂和二异丙基乙胺进行反应，反应结束后得反应物A，反应物A加入乙酸乙酯萃取得萃取物A，萃取物A用无水硫酸钠干燥，旋蒸后得到白色固体A；用四氢呋喃溶解白色固体A得溶解液B，在-20℃-0℃下向溶解液B中加入氢化铝锂进行反应，反应结束后得反应物B，向反应物B中加入盐酸水溶液猝灭氢化铝锂，并用乙酸乙酯萃取后再用无水硫酸钠干燥，旋蒸后得到保护的氨基醛；其中：保护氨基酸、缩合试剂、二异丙基乙胺、氢化铝锂之间的质量比为1∶1∶2∶2；

(2)制备氨基醛连接臂步骤：

向装有步骤(1)制备的保护的氨基醛的反应器中加入连接臂，反应结束后得反应物C，反应物C加入乙酸乙酯进行萃取得萃取物B，萃取物B用无水硫酸钠干燥，旋蒸后得到氨基醛连接臂；其中连接臂的加入量为保护的氨基醛的0.8倍；

(3)制备肽醛-树脂复合物步骤：

向装有树脂的砂芯反应器中加入二氯甲烷，静置，过滤后，向砂芯反应器中加入步骤(2)制备的氨基醛连接臂及二异丙基乙胺进行反应；反应结束后得反应物D，反应物D加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，并过滤掉溶液得到过滤物A，向存有过滤物A的砂芯反应器中加入体积比为1∶4的哌啶和二甲基甲酰胺混合溶液进行脱保护反应，反应结束后加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，并过滤掉溶液，然后向砂芯反应器中加入C端第二个氨基酸和缩合试剂进行缩合反应，缩合反应结束后加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，过滤掉溶液得到过滤物B，按照多肽从C端到N端的顺序，更换氨基酸，重复脱保护和缩合反应，得到保护的肽醛-树脂复合物；其中树脂、氨基醛连接臂、缩合试剂、二异丙基乙胺之间的质量比为1∶2-5∶2-5∶4-10；

(4)切割纯化得到肽醛精品步骤：

向装有步骤(3)制备的肽醛-树脂复合物的反应器中加入切割试剂进行切割反应，切割反应结束后，过滤，收集滤液A，滤液A旋蒸后得到肽醛粗品；采用C₁₈类型的反相色谱柱分离纯化肽醛粗品，得到肽醛精品。

在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(1)中的保护氨基酸为N-(9-芴甲氧羰酰基)-氨基酸。

所述N-(9-芴甲氧羰酰基)-氨基酸选自N-(9-芴甲氧羰酰基)-丙氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-苯丙氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-甘氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-异亮氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-缬氨酸中的一种。