[发明专利]一种乳清蛋白降血压肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及多肽的制备及初步分离技术。

背景技术

降血压肽，也称为ACE抑制肽（Angiotensin-converting Enzyme Inhibitory Peptides, ACEIP）是一类能够降低人体血压的小分子肽，它是血管紧张素转换酶（Angiotensin-converting Enzyme, ACE）的抑制剂，可通过抑制血管紧张素Ⅰ向血管紧张素Ⅱ转换以及阻止ACE降解缓激肽而起到降低血压的作用。尽管目前的多种化学合成肽类可以抑制ACE活性，但都有一定的副作用，且由于他们的作用时间不长，停药后会使血压反弹，而大量的实验证明乳蛋白来源的ACE抑制肽具有较高的体内降压作用，主要集中在小分子的肽类。1979年Oshima等最早报道食品蛋白源ACE抑制肽是由细菌胶原酶降解明胶获得的六条活性肽，并证实抑制ACE活性的肽分子量主要集中在1500u以下。1982年Maruyamas第一次从牛乳酪蛋白的胰蛋白酶水解液中分离出具有ACE抑制作用的十二肽、七肽、六肽和五肽。目前酶法制备乳源蛋白降血压肽的方法包括直接酶解法和利用微生物间接酶解法，直接酶解又可分为单酶水解和复合酶水解。Nakamura、Yamamoto 和Abubakar等采用微生物间接酶解法从酸牛乳、干酪乳清中得到了具ACE抑制作用的降血压肽；Aubois、拉尔夫、罗永康、毛学英等通过蛋白酶水解乳清蛋白的得到了具ACE抑制作用的降压肽。从目前已有的相关文献报道发现，水解乳清蛋白制备降血压肽主要使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等，均为单酶或双酶水解法，上述方法得到的降血压肽的分子量主要集中在1500u左右。

本发明模拟人体胃肠道消化的方式，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶单酶和复合酶三酶两步水解法制备乳清蛋白降血压肽，较单酶或双酶水解法得到的降血压肽分子量更小、体内吸收更容易。

发明内容

本发明的目的是提供一种以乳清蛋白为原料生产降血压肽的方法，通过模拟人体胃肠道消化的方式，采用三酶两步水解法获得具有高ACE抑制活性，且易于体内吸收的小分子降血压肽。

 本发明是这样实现的，一种乳清蛋白降血压肽的制备方法，包括如下步骤：

 (1) 乳清蛋白为原料，加水配制成质量浓度为1%~3%的乳清蛋白悬浊液，85℃~90℃保持10min使乳清蛋白变性，冷却至室温后调节pH=1.5~2.0，水解温度为35℃~40℃，每1g乳清蛋白加胃蛋白酶25000U~35000U，水解时间为1~3h；

 (2) 酶解结束后80℃~90℃保持10min灭酶，冷却至室温后4000r/min离心；

  (3) 取步骤(2)所得上清液，调节pH=7.5~8.0，水解温度为45℃~50℃，每1g乳清蛋白加胰蛋白酶10000U~20000U和胰凝乳蛋白酶10000U~20000U，水解时间为4~6h；

  (4) 酶解结束后80℃~90℃保持10min灭酶，冷却至室温后4000r/min离心，上清液真空浓缩后冷冻干燥得乳清蛋白降血压肽粗品；

(5) 取步骤(4)的乳清蛋白降血压肽粗品，配制20mg/ml的多肽溶液100mL，加入30g的DA201-C大孔吸附树脂，30℃条件下静态吸附3~5h，依次用25%、50%、75%、100%乙醇洗脱1~3h，收集并浓缩75%的乙醇洗脱组分；

 (6) 取步骤(5)中的质量百分比浓度为75%的乙醇溶液洗脱组分，利用Sephadex G-10凝胶层析进一步分离，超纯水1mL/min的流速进行洗脱，收集第二个洗脱峰，真空浓缩后冷冻干燥得粉末状乳清蛋白降血压肽。

本发明所具有的优点：

(1) 本发明提出了一种制备乳清蛋白降血压肽的新方法，通过模拟人体胃肠道消化的方式，采用三酶两步水解法。此法安全、无毒副作用，工艺简单易行，便于工业化生产。

(2) 本发明制备的降血压肽分子量分布在1000u以下、主要集中在600u左右，易于体内吸收，且具高ACE抑制活性。

(3) 本发明制备的降血压肽来源于牛乳蛋白，因此具有安全、无毒副作用，对正常血压无作用等特点，可用于制备降血压药物和食品。

具体实施方式：

实施例1