[发明专利]一株适合浓醪发酵的酿酒酵母菌株及其应用

权利要求书

1.一株适用于淀粉浓醪发酵乙醇的酿酒酵母菌株——酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ZTS3，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号：CCTCC No：M2011290，保藏日期：2011年8月16日。

2.如权利要求1所述的酿酒酵母CCTCC No：M 2011290在淀粉浓醪发酵制备乙醇中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为：将酿酒酵母CCTCCNo：M 2011290接种至适用于浓醪发酵的发酵培养基中，28～40℃发酵60～80h，发酵结束后发酵液经分离纯化获得乙醇。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述适用于浓醪发酵的发酵培养基按如下方法配制：按料水质量比1∶1.5～2.5称取玉米粉，加水搅拌均匀后按5～10U/g玉米粉添加量加入液化酶并升温至85～95℃保温0.5～2h，待混合液降温到50～60℃时按180～250U/g玉米粉添加量加入糖化酶，糖化0.5～1.0h后添加0.2％～0.5％的氮源尿素，即得所述发酵培养基。

5.一种构建适合浓醪发酵的酿酒酵母菌株的方法，所述方法包括：

(1)利用基因敲除技术，敲除工业酿酒酵母菌株的GPD2基因，获得工程菌ZΔGPD2；

(2)以工程菌ZΔGPD2为出发菌株，将其接种至产孢培养基中培养5d诱导产孢，所述产孢培养基组成如下：NaAc 10g/L，酵母提取物2g/L，葡萄糖1g/L，KCl 2g/L，pH 6.0溶剂为水；

(3)离心收集子囊孢子后加入体积比7∶2∶1的Tris-HCl(pH8.0，0.01mol/L)、100mg/mL蜗牛酶溶液和0.1mol/L巯基乙醇溶液，120r/min在30℃培养16h，使子囊壁破裂释放孢子，58℃高温处理15min致死营养细胞，对所有孢子进行混合后在YPD培养基中进行培养，随机杂交获得重组子，重组子用无菌水稀释后涂在有20％葡萄糖和15％乙醇的YPD平板，挑取50个生长快速的菌落进行发酵水平测定；

(4)再选取10株发酵性能优良的菌株重复上述步骤(2)～(3)进行第二轮和第三轮的重排，筛选第三轮重组子中表现最优的重组子，即获得构建适合浓醪发酵的酿酒酵母菌株。