[发明专利]猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物病毒学与动物传染病学检测技术领域。具体地说，本发明涉及一种猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测试剂盒及其在猪群中猪肺炎支原体抗体检测的应用。

背景技术

猪支原体肺炎俗称猪喘气病或猪地方流行性肺炎，广泛分布于世界各地，以慢性、接触性、高度传染性、高发病率以及低死亡率等为特点，主要表现为咳嗽和呼吸困难，解剖可见肺组织呈肉变或者大理石样病变。

猪肺炎支原体是猪呼吸道疾病综合征的重要病原之一，可继发感染PRRSV、PCV₂等，从而导致了多种疫苗的接种失败。猪肺炎支原体可经空气传播，此外还易与其他细菌性疾病如猪肺疫、传染性胸膜肺炎等并发，对养猪业造成重大经济损失，是当前最常发生、最广流行、最难净化的重要疫病之一。这主要是因为猪肺炎支原体能够穿透黏膜层与纤毛粘在一起，破坏纤毛的完整性，并分泌一些有害因子，而改变纤毛的游走性，致使纤毛大量脱落，这为其它细菌和病毒的入侵创造了条件，也就致使损失加剧。

猪肺炎支原体能在猪肺中长期滞留，治疗效果不佳，虽然该病引起的死亡率不高，但是流行的广泛性所造成的经济损失仍然是巨大的。据报道，猪肺炎支原体表面具有纤毛黏附因子，其感染猪的呼吸道后，能与黏膜上皮细胞纤维发生特异性结合，使猪肺炎支原体能够附殖并造成致病性。Raznis(1983)研究发现，猪肺炎支原体的致病力及免疫原性都与其细胞膜上的膜蛋白有关，Gear S J等(1985)从猪肺炎支原体菌株VPP11的细胞膜中分离得到了一种致病蛋白因子，发现其具有明显的免疫原性，并证实细胞膜蛋白是导致猪患猪支原体肺炎的主要因素。根据衣阿华大学的Ross研究发现，猪肺炎支原体感染后淋巴细胞产生抗体的能力下降，细胞免疫力下降，肺泡巨噬细胞对病原的吞噬和清除能力亦下降，抑制性T细胞的活动增强，导致呼吸道免疫力减弱，抗病力下降，从而使其它病原体更容易侵入。

对标准菌株和野外分离菌株的抗原分析表明，支原体肺炎含有几种主要免疫原，即：胞内具LDH活性的蛋白(P36)(Haldimann A，et al.1993；Stipkovits L，et al.1991)，3种膜蛋白(P46、P65和P70)(Kim M F，et al.1990；Mori Y T，et al.1988)和粘附素(P97)(Zhang Q T，et al.1995)。这些蛋白在急性或初次感染肺炎支原体后，可刺激产生早期和特异抗体。

目前关于猪支原体肺炎的诊断方法，国外研究较多，而国内研究较少，而且主要是间接血凝实验(IHA)和单抗原包被的ELISA方法。但是，IHA的检测中存在着检测滴度低、结果和感染的相关性低、凝集终点判定的主观性较强以及本身固有的技术缺陷等问题，因此IHA在商品猪群的Mhp检测中实际应用前景有限。ELISA是目前应用最广泛的检测技术，它具有敏感度高、特异性强和操作简单等特点。通过研究其特异性蛋白而建立的诊断方法是目前研究的热点。但是只选用一种蛋白作为唯一的包被蛋白，对于Mhp感染初期的猪很可能存在假阴性，若将Mhp的功能蛋白组合后再检测该病，可能检测结果更加准确可靠，易于大规模推广应用，具有更加广阔的应用前景。