[发明专利]高效液相色谱分析方法及其应用

权利要求书

1.一种高效液相色谱分析方法，所述分析方法包括：对含有甾体类化合物的混合物用高效液相色谱法进行成分分析；

其中，所述高效液相色谱法采用反相高效液相色谱，并且采用梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的流动相分别为水和95％乙腈。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述甾体类化合物包括：雄烯二酮和/或植物甾醇；优选地，所述植物甾醇包含菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和/或β-谷甾醇。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述高效液相色谱法采用的检测器为二极管阵列检测器。

4.根据权利要求3所述的分析方法，其中，所述高效液相色谱法采用的检测波长为210nm。

5.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述梯度洗脱的条件按时间分段设定为：

0至6分钟，水为10-15体积份、95％乙腈为90-85体积份；

大于6分钟至30分钟，水为0体积份、95％乙腈为100体积份；

大于30分钟至35分钟，水为10-15体积份、95％乙腈为90-85体积份。

6.根据权利要求5所述的分析方法，其中，所述梯度洗脱的时间与流速的程序如下表所示：

7.根据权利要求5所述的分析方法，其中，所述流动相分别在A泵和B泵中流动，并且所述梯度洗脱的条件为：

其中，所述A泵中为水，所述B泵中为95％乙腈。

8.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述高效液相色谱法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，并且所述十八烷基硅烷键合硅胶柱为150mm×4.6mm，柱温为30℃，进样量为3-20μl。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的分析方法，所述分析方法进一步包括对所述混合物中各成分的含量进行测定，所述测定包括：

1)分别配制不同浓度的雄烯二酮、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的标准溶液，采用所述高效液相色谱法分别测定所述各标准溶液的峰面积，并针对雄烯二酮、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇分别绘制峰面积-浓度标准曲线；

2)将所述混合物配制成样品溶液，采用所述高效液相色谱法测定所述样品溶液的峰面积；以及

3)由所述标准曲线计算出所述样品溶液中各成分的浓度，并由此计算出所述混合物中各成分的含量。

10.权利要求1-9中任一项所述的分析方法在植物甾醇微生物转化生产雄烯二酮中的应用，该应用包括：采用所述分析方法对该微生物转化过程中的发酵液进行成分分析。

11.根据权利要求10所述的应用，该应用还包括：根据所述成分分析的结果，确定所述发酵液中菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的浓度，并由此对所述微生物转化中采用的植物甾醇进行选择。

12.根据权利要求10所述的应用，该应用还包括：根据所述成分分析的结果，确定所述发酵液中雄烯二酮和/或植物甾醇的浓度，并由此确定生产的进程和/或生产的终点。