[发明专利]测定婴幼儿食品和乳品中维生素ADE的含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于一种测定婴幼儿食品和乳品中维生素ADE的含量的方法。

背景技术

维生素A(retinoL)、维生素D(VitaminD₂和VitaminD₃)和维生素E(α-E、γ-E和δ-E)是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素[1]。维生素A又称为视黄醇，具有促进机体生长、维持表皮完整、生殖、骨骼及视觉等功能；维生素D主要包括维生素D₂(麦角钙化醇)和D₃(胆钙化醇)，它们对哺乳动物有促进钙磷代谢及成骨作用；维生素E又称为生育酚，主要包括α-E、γ-E和δ-E，其中以α-生育酚的生物效应最高，具有促进生育、抗衰老的作用。由于这6种维生素在食品工业的生产加工过程广泛运用，而在外界环境中不稳定，很容易受光、氧等影响而被氧化破坏生产、运输、贮存中易对这6种维生素造成破坏，影响因素较多，因此维生素A、D和E的同时测定十分重要，但目前的检验技术仍存在众多难点，科研工作者一直在努力寻找合适的测定方法来得到准确、重现性好的结果。目前报道的反相HPLC测定法[2-4]样品经提取后，涉及到多次蒸发、溶解等步骤，前处理较麻烦、费时，易造成待测成份的破坏，导致测定结果偏低，而且只能同时测维生素A和E，不能用来同时测6种脂溶性维生素，对样品种类也有限制。现行的食品国家标准GB 5413.9—2010婴幼儿食品和乳制品中维生素A、D、E的测定，采用硅胶柱净化待测液，回收馏分的方法测定维生素D。国家卫生标准方法不能对这6种维生素进行同时测定，且测定时间长、方法繁琐，可能导致样品中脂溶性维生素损失而使回收率下降。不仅在检测时间和人力方面的大量消耗，也为实验结果的稳定性增添了诸多影响因素，不利于检验结果的系统分析，同时也是对有限资源的一种浪费。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定婴幼儿食品和乳品中维生素ADE含量的方法。

本发明的目的是这样实现的，其具体步骤为：

1）准确称取婴幼儿食品或乳品样品，置于棕色碘量瓶中，加入焦性没食子酸乙醇溶液，震摇，使各组分混合均匀后，加入KOH水溶液，所述KOH水溶液中的KOH与水体积比为1：2，摇匀，放置在70-100℃水浴锅中回流皂化完全后，迅速冷却后将样品置于棕色分液漏斗中，接着用石油醚与乙醚体积比为2：1的醚溶液荡洗碘量瓶，洗液移入棕色分液漏斗，振摇、静置至完全分层,分有机层和水层，水层置于盛有石油醚与乙醚体积比为2：1的醚溶液的另一棕色分液漏斗中再次萃取，有有机层和水层，合并上述两次有机层；用去离子水反复清洗有机层，直至不显碱性，有机层提取液经无水硫酸钠除水、过滤，置于圆底烧瓶中，35-50℃水浴下氮气吹至近干后用甲醇溶解并转移至刻度试管中，用氮吹仪吹至1mL，再用甲醇定容2mL，经过微孔滤膜过滤，上色谱柱分离；2）采用体积比为8：92的10%乙腈∶甲醇流动相分离；流速为0.3 mL/min；3）296nm、264nm、325nm三波长同时检测维生素A、维生素D和维生素E，维生素A、维生素D和维生素E的检测质量浓度分别在1.0-100.0μg/L、1.0-100.0μg/L、0.50-50.0 mg/L之间。

所述色谱柱：ACQUITY UPLC BEH shieLd RP18 2.1mm×150mm 1.7 μm；

液相系统：沃特世ACQUITY UPLC配ACQUITY TUV紫外检测器；

柱温：35℃；

流动相A：10%乙腈；

流动相B：甲醇；

检测波长：325 nm、265 nm、290 nm；

分析时间：8 min；

进样量：3 μL；

采用梯度洗脱。

本发明的检测方法的主要技术特点： 

本发明采用反相高效液相色谱法同时测定食品中维生素A(retinol)、维生素D(Vitamin D₂和Vitamin D₃)和维生素E(α-E、γ-E和δ-E)的方法，样品处理简单，方法简便易行。并用建立的方法对奶粉及乳制品中维生素A、D和E进行了测定，在保证原有检出限的基础上大大节省实验时间及耗材，最重要的是能确保较高的数据重现性，并能同时进行γ-E和δ-E的定量检测，从而提供更为准确、可靠性高的检验结果。为生产实践中的广泛运用，提供进行生产工艺分析和大批量检验的可能。