[发明专利]一种帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种顺反异构体的检测分离方法，特别是同时检测、分离帕罗醇反式与顺式异构体的高效液相色谱(HPLC)方法。

背景技术

帕罗醇为具有如下结构的化合物：

由于结构中存在哌啶环式结构，产生了顺式与反式异构体。而只有反式帕罗醇是抑郁症和强迫症的治疗药物帕罗西汀合成中所用的关键起始原料，其具有如下的分子结构：

在合成反应中，帕罗醇中的反式与顺式异构体均参与反应。由于顺式帕罗醇参与反应后生成的产物与帕罗西汀性质极为相似，工艺中除去较为困难，因此需严格控制反式帕罗醇中顺式异构体的含量。找到一种可快速、准确地检测并分离帕罗醇原料中反式与顺式异构体的方法，是摆在药物分析工作者面前的一项重要任务。

由于顺反式帕罗醇之间的各项理化性质极为相似，在分析分离中存在困难，在现有技术中尚无有关该化合物的顺反异构体检测分离方法的公开。关于其它化合物非对映异构体的HPLC分离检测方法，现有技术已有公开。如李桂芹等发表的《瑞舒伐他汀钙非对映异构体的检测》(药物分析杂志，2006，26(11)，1551-1554)中，对瑞舒伐他汀钙的非对映异构体分离检测采用了C18反相色谱柱和水-甲醇-乙腈组成的极性较强的流动相。中国专利申请CN200680035525.2中对2-氟维司群非对映异构体的HPLC检测有两种色谱系统公开，一种是采用反相系统，使用水或缓冲液与乙腈、四氢呋喃或甲醇组成的流动相进行非线性梯度洗脱；一种是直接采用手性柱，使用至少一种C₅-C₁₀的烷烃和C₃的醇组成的极性较弱的流动相进行等度洗脱。另一篇中国专利申请CN200710064576.4中对于地西他滨的非对映异构体则使用正相色谱系统，通过选用普通硅胶柱，以极性较弱的正己烷-低级醇溶液作为流动相实现了分离检测。可见，同样是对非对映异构体的HPLC分离检测，所选用的色谱柱种类、流动相极性、洗脱方式等各有特点。这是由于色谱过程是被测组分分子在流动相和固定相间多次分配达到平衡的过程，而分配系数取决于组分、流动相和固定相的性质。色谱条件的选择是综合考虑化合物本身极性、溶解性，固定相和流动相的极性，以及它们之间的相互作用的结果。因此，不同化合物之间的HPLC检测条件不具有参考意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测分离方法。通过该方法，可准确、快速测定反式和顺式帕罗醇含量并予以分离，进而实现对帕罗西汀原料反式帕罗醇的质量控制。

本发明提供的一种帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测方法，包括选择色谱条件、供试品和对照品溶液的配制和进样检测过程，其中，色谱条件以硅胶柱为色谱柱，以正己烷和乙醇体积比为60∶40-75∶25的混合溶液为流动相，检测波长为267nm。

所述的帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测方法，其中流动相中可进一步含有二乙胺，优选为0.4-0.6％(体积百分比浓度)，更优选为0.5％。

所述的帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测方法，其中色谱柱选用硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)。

所述的帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测方法，其中流动相流速为0.8-1.2ml·min^-1，柱温为20-25℃，进样量为10-20μl。

所述的帕罗醇顺反异构体的高效液相色谱检测方法，优选的，色谱柱：硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：0.5％的二乙胺正己烷溶液∶0.5％的二乙胺乙醇溶液＝68∶32，检测波长：267nm，流速：0.8-1.2ml·min^-1，柱温：20-25℃，进样量：10-20μl。

本发明提供的方法中供试品及对照品溶液的配置和进样检测过程，可通过常规方法予以实现，如可采用下述方法进行：

(1)供试品溶液的配制：精密称取供试品适量，置于量瓶中，加流动相溶解并稀释至4mg·ml^-1，摇匀，过滤，作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的配制：分别精密称取反式帕罗醇与顺式帕罗醇对照品适量，置于量瓶中，加流动相溶解制成含反式帕罗醇4mg·ml^-1、顺式帕罗醇4μg ml^-1的溶液，摇匀，过滤，作为对照品溶液；

(3)进样检测：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，记录色谱图。