[发明专利]一种制备帕立骨化醇的方法无效
申请号: | 201110279311.2 | 申请日: | 2011-09-20 |
公开(公告)号: | CN102392053A | 公开(公告)日: | 2012-03-28 |
发明(设计)人: | 陆群;冯海婷;文鹏;孙博;万阳;周傲群 | 申请(专利权)人: | 西南交通大学 |
主分类号: | C12P7/02 | 分类号: | C12P7/02;C12R1/01 |
代理公司: | 成都信博专利代理有限责任公司 51200 | 代理人: | 张澎 |
地址: | 610031 四川省成都市*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 制备 骨化 方法 | ||
1.一种制备帕立骨化醇的方法,以维生素D2为原料,采用如下的化学反应和生物反应步骤获得治疗骨质疏松症药物帕立骨化醇:1-α-羟基-19-去亚甲基维生素D2(ix):
化学反应部分:
高锰酸钾水溶液在-20℃下,以醇类溶剂溶解环化物(iii):滴加浓度为5-20%的高锰酸钾水溶液,搅拌反应1-10小时最好3小时,浓缩去除水,残余物用同体积乙醇稀释;0℃下,加入10-20%的高碘酸钠水溶液,搅拌2-5小时,最好3小时,用等体积1-5个碳的氯代烷烃,1-5个碳的羧酸酯等萃取,浓缩至干,得到10羰基环化维生素D2(iv);在-78℃下,滴加非极性溶剂的强碱,加入三氟甲烷磺酸酐、N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺,得到烯醇基三氟甲烷磺酸酯(V);用甲酸及醋酸钯还原得到1,10双键的环己烯衍生物(vi),使用硼氢化试剂经碱性过氧化氢氧化得到1-羟基-19-去甲维生素D2(vii),采用低分子有机酸开环,洗涤后再经4%的氢氧化钠甲醇溶液水解得到1-羟基-10去甲维生素D2(viii);
生物反应部分
1-羟基-19-去甲维生素D2(viii)作为底物用菌株CGMCC 5098在通气搅拌的状态下,在碳源、氮源、矿物盐的培养基中进行生物转化,发酵温度22-30℃,最好是27℃,pH范围6.5-7.5,最好是7.0,通气量在0.5-1.0v/v/min;将1-羟基-19-去甲维生素D2(viii)作为底物加入到培养液中,底物浓度最好是1-15g/升,底物加入培养基的时间通常是在碳源将近消耗完时加入底物最佳,通常是常是菌株培养2天后加入底物;
在继续上述的培养的过程中产生25位的羟基化生物转化,转化的时间取决于培养基的组成和菌株,通常继续培养1-7天,最好是4天;最后经固液分离,分别对菌丝和滤液用有机溶剂抽提,经硅胶柱层析,丙酮/水重结晶得到纯的得到目标产物1-羟基-25-羟基-19-去甲维生素D2(ix),即帕立骨化醇。
2.根据权利要求1所述的一种制备帕立骨化醇的方法,其特征在于,所述溶解环化物(iii)的醇类溶剂可为:乙醇、丙醇、异丙醇。
3.根据权利要求1所述的一种制备帕立骨化醇的方法,其特征在于,所述由10羰基环化维生素D2(iv)得到烯醇基三氟甲烷磺酸酯(V)步骤中所滴加非极性溶剂的强碱可为:六甲基二胺基锂、正丁基锂、叔丁基锂、氨基钠。
4.根据权利要求1所述的一种制备帕立骨化醇的方法,其特征在于,所述由1,10双键的环己烯衍生物(vi)经碱性过氧化氢氧化得到1-羟基-19-去甲维生素D2(vii)步骤中所用硼氢化试剂可为:9-硼二环[3.3.1]壬烷(9-BBN),硼烷、二异松蒎基氯硼烷,二乙基甲氧基硼烷。
5.根据权利要求1所述的一种制备帕立骨化醇的方法,其特征在于,所述培养基采用:
种子培养基:1.5%葡萄糖,1.5%黄豆饼粉,0.5%玉米浆,0.5%NaCl,0.2%CaCO3,pH自然;121℃灭菌20min;
发酵培养基:1.5%葡萄糖,2.0%黄豆饼粉,1.0%玉米浆,0.5%NaCl,0.2%CaCO3,pH自然;121℃灭菌20min;
一级种子以1-10%的接种量接入发酵培养基,发酵温度28℃,通气量0.5v/v/min,培养48小时。
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