[发明专利]一种日本乙型脑炎病毒样颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种日本乙型脑炎病毒样颗粒，其特征在于是由日本乙型脑炎病毒PrM/E蛋白或日本乙型脑炎病毒PrM/E蛋白和日本乙型脑炎病毒RNA复制子包装而成，所述RNA复制子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述日本乙型脑炎病毒样颗粒的制备方法，其特征在于步骤为：扩增日本乙型脑炎病毒PrM/E基因，将扩增产物连接到Tet-on advance表达系统的质粒pTRE-Tight中，形成重组载体，Xfect法转染Hela Tet-on advanced 细胞，经HygB筛选鉴定后，有限稀释法获得可调控的稳定表达PrM/E基因的Hela细胞系，强力霉素诱导表达PrM/E蛋白，可包装出常规的病毒样颗粒；用包含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示RNA复制子的载体转染可调控的稳定表达PrM/E蛋白的Hela细胞系，可包装出具有“一过性感染”能力的病毒样颗粒。

3.根据权利要求2所述日本乙型脑炎病毒样颗粒的制备方法，其特征在于所述扩增日本乙型脑炎病毒PrM/E基因是以日本乙型脑炎病毒疫苗株总RNA为模板，用RT-PCR方法得到日本乙型脑炎病毒疫苗株cDNA，设计引物序列如SEQ ID NO:2~3，扩增得到PrM/E基因。

4.根据权利要求2所述日本乙型脑炎病毒样颗粒的制备方法，其特征在于转染Hela Tet-on advanced 细胞的重组载体的浓度为500ng/μl。

5.根据权利要求2所述日本乙型脑炎病毒样颗粒的制备方法，其特征在于所述HygB的最低有效浓度为200μg/mL。

6.根据权利要求2所述日本乙型脑炎病毒样颗粒的制备方法，其特征在于强力霉素的浓度为1μg/mL。

7.根据权利要求3所述日本乙型脑炎病毒样颗粒的制备方法，其特征在于所述包含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的RNA复制子的载体，具体序列如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。

8.权利要求1所述日本乙型脑炎病毒样颗粒在疫苗制备或诊断试剂中的应用。