[发明专利]检测水产品中四种常见致病菌的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.检测水产品中四种常见致病菌的试剂盒，包括Mg²⁺、dNTP、Taq酶、PCR Buffer、引物、灭菌双蒸水，其特征在于，所述引物由以下序列组成：

沙门氏菌引物上游序列：5’-GGTCGTCGT TGGGACTGATTGG-3’，下游序列：5’-CCGTGGCATGTCTGAGCACTTC-3’；

志贺氏菌引物上游序列：5’-GCTCGAAACGGGCTGTGCTAATG-3’，下游序列：5’-ACGGTATCGGAAAGGCGGTCA A-3’；

金黄色葡萄球菌引物上游序列：5’-AACGGCAATACGCAA AGAGG-3’、下游序列：5’-TATACGCTAAGCCACGTCCATA-3’；

副溶血性弧菌引物上游序列：5’-CTGATAACAATGACGCCTCTGCTA AT-3’，下游序列：5’-TCTGATACTCACCAATCTGACGGAACT-3’。

2.检测水产品中四种常见致病菌的方法，其特征在于包括以下步骤：

a) 样品增菌培养：配制选择性增菌培养液，各组分的浓度为：缓冲蛋白胨水20 g/L、鱼蛋白胨12 g/L、胆盐3号3 g/L、柠檬酸钠1.5 g/L、氯化锂1 g/L、亚碲酸钾1.2 mg/L、氯化钠15 g/L、葡萄糖2 g/L、甘露醇1 g/L、丙酮酸钠4 g/L，调节pH值为 7.8；取水产品样品加入选择性增菌培养液中，均质1 分钟，于恒温振荡器中37 ℃，150 rpm培养6 h；

b) 提取菌液DNA；

c) PCR扩增：使用权利要求1所述的试剂盒对菌液DNA进行扩增，扩增反应条件如下：采用冷启动，94℃预变性4 min，变性94℃ 30 s，退火58.1℃ 1 min，延伸72℃ 1 min，30个循环，终延伸72℃ 5 min；

d) 将扩增产物于2%琼脂糖凝胶电泳进行检测。