[发明专利]一种用于诊断迟发性耳聋的GJB2基因p.V37I突变诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，具体地说，是一种用于诊断迟发性耳聋的GJB2基因p.V37I突变诊断试剂盒。

背景技术

听力是语言发育过程中不可缺少的因素之一。对患有儿童永久性听力损失（Permanent Childhood Hearing Impairment，PCHI）的患儿进行早期的预防和干预可取得良好的言语和认知发育。目前，普遍性新生儿听力筛查（Universal Newborn Hearing Screening，UNHS）可早期发现新生儿期的听力损失，但对于发生于新生儿期以后的迟发性耳聋（发病率在9岁儿童中约为0.25‰-0.99‰），由于缺乏有效的风险因素评估和早期识别标识，尚缺乏有效的早期发现手段。

新生儿听力筛查技术在世界各国广泛开展，可通过此筛查早期发现新生儿期听力损失并进行早期干预，以避免新生聋儿由听力障碍而带来的言语、语言等发育障碍。但发生于新生儿期以后的迟发性耳聋不能被新生儿听力筛查所发现，目前尚缺乏能够早期预警或早期发现的有效手段。迟发型耳聋的最初发现目前主要依靠家长对患儿听力状况的观测或患者自我检测，发现时间较晚，容易因为听力损失影响言语、语言等学习交流能力的正常发展。 

耳聋基因检测技术近十年来已在国内外得到广泛应用，可对遗传性耳聋进行有效检测和诊断。迟发性耳聋基因检测原理上可对存在迟发性耳聋遗传风险的患儿进行早期预警，结合听力筛查以达到早期检测、干预和康复的目的。但此方法的瓶颈在于目前尚不知晓明确的可导致常见迟发性耳聋遗传易感性的早期分子标识（基因突变），因此无法有针对性的开展迟发性耳聋基因检测。

GJB2基因为中国人群常见聋病基因，其基因突变可导致隐性遗传性耳聋。在GJB2基因众多突变中，p.V37I突变较为常见，带有p.V37I排它性突变（包括p.V37I纯合，以及p.V37I与另外一个功能丧失突变的复合杂合两种基因型）的个体易出现轻中度耳聋。

中国专利文献CN101363054A公开了一种体外检测遗传性耳聋相关缝隙连接蛋白26基因GJB2突变的方法及检测用试剂盒，通过进行聚合酶链反应，对GJB2基因基础启动区、外显子1、外显子2及剪切区域进行完整扩增，然后进行DNA序列测定，检测GJB2基因突变的存在，能提高GJB2基因突变的检出率和GJB2基因相关性遗传性耳聋的诊断率。中国专利文献CN1873027A公开了一种用于体外诊断非综合征性常染色体隐性遗传耳聋基因GJB2突变的引物及其应用，提供用于体外诊断非综合征性常染色体隐性遗传耳聋基因GJB2基因全编码区突变及233-235delC热点突变的引物，可一次性完成GJB2全编码区和两侧重要剪切序列的扩增，该发明还提供含有该引物和ApaI内切酶的试剂盒或类似产品，适用于对非综合征性常染色体隐性遗传耳聋基因GJB2基因突变进行大规模的筛查及诊断、遗传咨询。李景之等运用PCR直接测序的方法对139例无亲缘关系的NSHL患者进行突变筛查，将两种突变p.F115C和p.V37I构建到pEGFP表达载体，并转染Hela细胞，研究其细胞表达和定位情况（详见：非综合征性耳聋（NSHL）患者Cx26基因突变分析及两种突变体的亚细胞定位. 遗传, 2009, 31(7): 705-712.）。但是国际、国内尚无关于p.V37I排它性突变与迟发性耳聋相互关联的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种GJB2基因p.V37I突变的应用。

本发明的再一的目的是，提供一种用于诊断迟发性耳聋的GJB2基因p.V37I突变诊断试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种用于诊断迟发性耳聋的GJB2基因p.V37I突变诊断试剂盒的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种GJB2基因p.V37I突变在制备诊断迟发性耳聋产品中的应用，所述的p.V37I突变是p.V37I排他性突变。

所述的p.V37I排他性突变是p.V37I纯合基因型突变。

所述的p.V37I排他性突变是p.V37I与一个功能丧失突变的复合杂合基因型突变。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：一种用于诊断迟发性耳聋的GJB2基因p.V37I突变诊断试剂盒，所述的试剂盒含有两对巢式PCR扩增引物，所述的扩增引物为：

第一轮PCR的引物：GJB2 FO（SEQ ID NO.3）和GJB2 RO（SEQ ID NO.4）；第二轮PCR的引物：GJB2 FI（SEQ ID NO.5）和GJB2 RI（SEQ ID NO.6）。