[发明专利]冷藏温度稳定的流感疫苗组合物

权利要求书

1.一种制备流感病毒组合物的方法，所述方法包括：

(a)过滤澄清包含冷适应活流感病毒的病毒收获物，从而得到包含冷适应活流感病毒的澄清的病毒收获物滤液；

(b)对所述包含冷适应活流感病毒的澄清的病毒收获物滤液进行连续区带离心，从而得到包含冷适应活流感病毒的进一步澄清的病毒收获物；和

(c)对所述包含冷适应活流感病毒的进一步澄清的病毒收获物进行稀释和通过无菌过滤进行除菌，从而得到冷适应的活流感病毒组合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷适应流感病毒包括以下一种或多种：减毒的冷适应流感病毒，温度敏感型冷适应流感病毒、或减毒的减毒的冷适应性温度敏感型流感病毒。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷适应流感病毒含有一种或多种以下流感病毒的遗传骨架：A/Ann Arbor/6/60和B/Ann Arbor/1/66。

4.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，通过在澄清之前加入稳定剂使得所述病毒收获物在2-8℃稳定。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述稳定剂包含蔗糖、磷酸盐和谷氨酸盐(SPG)。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，加入所述稳定剂使得最终浓度为0.2M蔗糖、0.01M磷酸盐和0.005M谷氨酸盐。

7.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，通过一个或多个滤器作深部过滤来澄清所述病毒收获物。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在(a)中通过两个或更多个滤器来澄清所述病毒收获物。

9.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，通过5μm滤器进行过滤来澄清所述病毒收获物。

10.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，在蔗糖密度梯度上进行所述连续区带离心。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述蔗糖密度梯度是磷酸盐缓冲液配制的10％-60％蔗糖梯度。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液配制的所述蔗糖梯度为pH 7.2。

13.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，在2℃-8℃的温度下进行所述连续区带离心。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，在4℃的温度下进行所述连续区带离心。

15.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，加入包含磷酸盐和谷氨酸盐的稀释剂以进一步澄清步骤(c)中的病毒收获物。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，向所述进一步澄清的病毒收获物中加入所述稀释剂使得最终浓度为0.2M蔗糖、0.1M磷酸盐和0.005M谷氨酸盐。

17.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，包括混合所述除菌病毒收获物与至少一种其它除菌病毒收获物，从而得到混合的病毒收获物。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述除菌病毒收获物与两种其它除菌病毒收获物混合，从而得到三价混合病毒收获物。

19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，用100mM磷酸盐缓冲液稀释所述混合病毒收获物至终浓度为6-8％蔗糖重量/体积(w/v)；1-2％精氨酸w/v；0.05-0.1％谷氨酸单钠w/v；和0.05-2％明胶水解物；从而得到液体冷藏稳定的并且在4℃-8℃储存12个月后其效力损失低于1.0log的流感病毒组合物。

20.如权利要求18所述的方法，其特征在于，用100mM磷酸盐缓冲液稀释所述三价混合病毒收获物至终浓度为6-8％蔗糖重量/体积(w/v)；1-2％精氨酸w/v；0.05-0.1％谷氨酸单钠w/v；0.05-2％明胶水解物；从而得到液体冷藏稳定的并且在4℃-8℃储存12个月后其效力损失低于1.0log的流感病毒组合物。

21.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中先进行稀释再除菌。