[发明专利]重组人促卵泡激素及其制备

权利要求书

1.高比活性的重组促卵泡激素，优选是重组人促卵泡激素(rhFSH)，其比活性大于12200IU/mg，优选大于12300IU/mg，最优选为12350～12400IU/mg，如12390IU/mg。

2.权利要求1所述的重组促卵泡激素，其由如下制备方法制备而得：

(1)将FSHα亚基基因和FSHβ亚基基因可操作地插入真核表达载体中，获得能表达FSHα亚基蛋白和FSHβ亚基蛋白的转染载体，其中，FSHα亚基基因包含编码FSHα亚基蛋白的cDNA序列和上游内含子序列，FSHβ亚基基因包含编码FSHβ亚基蛋白的外显子2、内含子2和外显子3序列；

(2)将转染载体转染入真核细胞并培养；和

(3)将培养上清液依次经超滤、阴离子交换层析、疏水层析、阴离子交换层析、分子排阻层析和阴离子交换层析纯化。

3.权利要求2所述的重组促卵泡激素，其中，FSHα亚基基因的多核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，和/或，FSHβ亚基基因的多核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.权利要求2所述的重组促卵泡激素，其中，真核表达载体是哺乳动物表达载体，优选是pIRES载体。

5.权利要求4所述的重组促卵泡激素，其中，将FSHα亚基基因和FSHβ亚基基因分别插入pIRES载体中的Nhe I/EcoR I酶切位点之间和Xba I/Not I酶切位点之间。

6.权利要求2所述的重组促卵泡激素，其中，真核细胞是哺乳动物细胞，优选是中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，更优选是CHO-S细胞。

7.权利要求2所述的重组促卵泡激素，其中，阴离子交换层析选自DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析和/或Capto Q阴离子交换层析，疏水层析是Phenyl Sepharose HP疏水层析，分子排阻层析是Sephacryl S-100HR分子排阻层析。

8.药物组合物，其包含权利要求1-7之任一所述的重组促卵泡激素和药学上可接受的载体。

9.如权利要求2-7之任一所述的重组促卵泡激素的制备方法。

10.可用于权利要求9所述的重组促卵泡激素的制备方法中的中间体，其选自：

(a)FSHα亚基基因，其包含编码FSHα亚基蛋白的cDNA序列和上游内含子序列，优选其多核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

(b)FSHβ亚基基因，其包含编码FSHβ亚基蛋白的外显子2、内含子2和外显子3序列，优选其多核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

(c)载体，其包含(a)和/或(b)所述的基因，优选其为pIRES-FSH-α/β；

(d)细胞，优选是CHO细胞，更优选是CHO-S细胞，其包含(a)和/或(b)所述的基因，或者其转染入了(c)所述的载体；或

(e)细胞上清液，其为培养(d)所述的细胞所得的上清液。